ALM-MM-Bakt; OS,Matrix,BTS og vask av plater MaldiTof v. 1.0

OS Organic solution (Standard Solvent)

•        475 µl destillert/sterilt vann i et rør

•        500µl Actetonitrile (ACN)

•        25µl 100% Trifluoracetic Acid (TFA)
Vortex

Holdbarheten til OS er 7-10 dager. Skriv på røret tillagingsdato.

 

 

 

Matrix

  • Ta fram 1 rør med” HCCA matrix portioned” (Oppbevares i kjøleskapet på pusslaben)
  • Tilsett 250 μl” OS” til et rør” HCCA matrix portioned” og vortex til all matrixkrystaller er oppløst
  • Merk røret med dato og signatur, og signer på skjema
  • Ferdig laget matrix kan oppbevares i romtemp.i opptil 2 uker (”best før”) .Oppbevares mørk

 

 

 

MALDI -TOF kontroll (BTS- Bacterial Test Standard)

 

1.

Ta opp et BTS-rør fra fryseren (gul topp) Nok til ca. 40 tester

2.

Bruk ny OS (OS=Standard Solvent). Pipetter 50 µL OS

3.

Bland med pipetten opp/ned minst 20 ganger. NB! Unngå å skumme

4.

Inkuber i 5 min ved romtemperatur

5.

Repeter punkt 3

6.

Frys ned ved minst 18 ºC, fryseskap på pusslaben.

7.

Ikke oppbevar BTS-kontrollen i romtemperatur.

8.

Frys ned rett etter bruk.

9.

Marker røret som er i bruk med et kryss på toppa.

10.

Kjør en kontroll med den nye BTS’en

11.

Signer på skjema.

 

 

 

 

Vasking av MALDI – target.

Arbeid foregår i avtrekksskap med hansker

 

 1.

Tom petriskål dekkes med linsepapir

 2.

MALDI-target (platen) legges oppi

 3.

Dekk over med 75 % sprit/etanol. La stå i 5 min.

 4.

Tørk av med linsepapir

 5.

Skyll platen under varmt springvann
Bruk tommel til å stryke over targets mens vannet renner

 6.

Tørk av med linsepapir

 7.

Dekk over med 75 % sprit. La stå i 3 min.

 8.

Tørk av med linsepapir

 9.

Skyll platen under varmt springvann

10.

Bruk tommel til å stryke over alle targets mens vannet renner

11.

Tørk av med linsepapir

12.

Deponer 150µl 80 % Trifluoreddik syre (TFA) på hver plate. Bruk bomullspinne til å gni godt over alle targets

13.

Tørk av med linsepapir
NB! Ikke få TFA på hanskene

14.

Skyll godt med destillert vann og tørk av med linsepapir. Tørk godt av på undersiden av platen med linsepapir. Viktig å skylle godt med destillert vann da mineraler og ioner i springvann kan forstyrre under avlesning

15.

Legg platen oppi lagringsboksen. La boksen stå åpen 5-7 min før lokket lukkes.