Hensikt
Prosedyren skal sikre at Cryptococcus antigen test (CrAg Lateral Flow Assay), blir utført på korrekt måte. Prosedyren gjelder påvisning av Cryptococcus antigen i serum, plasma og spinalvæske.
Omfang
Alle bioingeniører som er opplært til å utføre denne type analysearbeid ved Lab. for med. mikrobiologi.
Grunnlagsinformasjon
VERIFISERING
Det er ikke utført verifisering av testen da tilgang på positive prøver er begrenset.
Analysen er godt beskrevet i litteratur, og metoden har vist sin gyldighet gjennom langt tids bruk ved St. Olavs hospital.
Testen er et supplement og skal alltid kombineres med vanlig metode som dyrkning og mikroskopi.
ANALYSEPRINSIPP OG TERMINOLOGI
CrAg Lateral Flow Assay er en immunokromatografisk test som inneholder både gull-konjugerte anti-CrAg monoklonale antistoffer og gull-konjugerte kontroll antistoffer immobiliserte på en test membran. Hvis det er CrAg i prøvematerialet, binder det seg til de gull-konjugerte anti CrAg monoklonale antistoffene, som videre binder seg til gull-konjugerte kontroll antistoffer. Det gull-merkete antistoff-antigen komplekset danner ”sandwich” med synlig test linje på test membranen.
Kryptokokkose er forårsaket av Cryptococcus neoformans species complex, både subspecies C. gattii og C. neoformans. Mennesker blir smittet via inhalasjon av sporer. Immunsupprimerte personer har større risiko for å utvikle sykdom. Infeksjon kan spre seg fra lungene til hjerne og hud. Meningoencephalitt er en fatal sykdom hvis pasienten ikke får adekvat behandling raskt.
BIOSIKKERHET
Arbeid med C. gattii og C. neoformans krever «Biosikkerhet nivå 2» (BSL-2) som inkluderer et biologisk sikkerhetsskap i klasse I eller klasse II.
REFERANSER
Hovedreferanse:
1 Kit-vedlegg fra produsenten Immy REF CR-2003
Tilleggsreferanse:
2 SOH’s prosedyre Cryptococcus antigen, EQS id 26339
4 Varsling smittsomme sykdommer - FHI
5 Applying Genetics and Molecular Biology to the Study of the Human Pathogen Cryptococcus neoformans - PMC (nih.gov) Biosikkerhet
KVALITETSKONTROLL
Utføres hver gang nytt lot nr tas i bruk.
- Tilsett 1 dråpe av LF Specimen diluent (REF GLF025) til reagensrør.
- Tilsett 1 dråpe CrAg positiv kontroll og bland godt.
- Ta en testenhet ut av pakningen og dypp den hvite enden av CrAg Lateral Flow Test Strip (REF LFCR50) inn i den fortynnede kontrollen.
- Les av resultatet etter 10 minutter
- Resultat av kontroll, dato og signatur skrives utenpå det testede kitet, samt på kontrollskjema i teams.
Arbeidsbeskrivelse
ANSVAR
Fagbioingeniør som er tillagt denne analysegruppen, har ansvar for vedlikehold av denne prosedyren.
ARBEIDETS GANG
Denne testen skal utføres der hvor rekvirent har bestilt soppdyrkning som egen analyse på spinalvæske og ev. funn av sopp ved mikroskopi i spinalvæske, eller i andre tilfeller hvor soppdyrkning er indisert.
Blodkulturpanelet til Filmarray kan dektektere Cryptococcus neoformans/gattii, men resultatet må alltid konfirmeres med en annen metode.
CrAg Lateral Flow Assay er ikke verifisert for bruk ved direkte påvisning i blodkultur.
Dersom positiv blodkultur på Filmarray med Cryptococcus neoformans/gattii, konferer med medisinsk faglig ansvarlig hvorvidt det er aktuelt med utførelse av analysen direkte i blodkultur - før testen skal utføres.
Ved positiv hurtigtest, skal isolatet sendes til referanselab. som andre sopp isolat. Ingen forsendelse til SOH. Oppvekst av Cryptococcus neoformans/gattii,kan ta tid. Forventet vekst innen en uke, men kan ta opptil 4-6 uker før oppvekst. Dyrkningstiden på sabouraud agar må utvides med opp til 6 uker ved positiv hurtigtest. Agar må pakkes i egen plastpose for å unngå inntørking.
Stammer, reagenser og klargjøring av disse
Cryptococcus antigen kit (IMMY CrAg LFA), oppbevares ved 2-30°C.
Kit i bruk oppbevares romtemperert ved blodkulturplassen. OBS! Kontroller holdbarhetsdatoen.
I
tillegg trenger du:
Pipette 40-80µl
Glassrør (reagensrør)
Klokke
Prøvetaking og oppbevaring av prøven
For beste resultat, bør sterile og ikke-hemolyserte prøver (se prøvemateriale) brukes i testen. Ved forsinket utførelse av testen, kan prøvene oppbevares ved 2-8 °C opptil 72 timer. For lengre perioder, kan prøvene oppbevares ved -20 °C, under forutsetning at de ikke blir tint og frosset på nytt. Sendeprøver bør pakkes med kjølelement og sendes i temp. fra 2-8 °C eller -20 °C.
Dersom prøvemateriale er oppbevart i romtemperatur over natt før analysering må medisinsk faglig rådgiver kontaktes for vurdering.
Utførelse av analysen
Prøvemateriale: Spinalvæske.
Analysen kan også utføres i serum og plasma.
Analysen er ikke verifisert for urin jfr. pakningsvedlegg.
Konferer medisinsk faglig ansvarlig i slike tilfeller og før testen skal utføres.
Utføres i avtrekk med smittefrakk og hansker
Kvalitativ prosedyre:
• Tilsett 1 dråpe av LF Specimen diluent (REF GLF025) til reagensrør (glassrør).
• Tilsett 40µl av prøven og bland godt med pipette (10-15 ganger)
• Ta en testenhet ut av pakningen og dypp den hvite enden av CrAg Lateral Flow Test Strip (REF LFCR50) inn i den fortynnede prøven.
• Les av resultatet etter 10 minutter og innen 2 timer.
• Positiv kontroll kan tas med dersom man er usikker på avlesning av test.strips. Følg fremgangsmåte under avsnitt «Kvalitetskontroll».
Alltid konferer lege for vurdering av positivt resultat, og eventuelt behov for semikvantitativ titreringsprosedyre (se vedlegg for utførelse).
Besvarelse og videre arbeid:
Analysenavn: Cryptococcus spp antigen i USP
Alle prøver skal besvares i Beaker.
Alle besvarelser skal ha med kommentar .IKKA (Ikke akkreditert analyse).
Med. fag.ansvarlig skal varsles med en gang ved positivt resultat.Med. fag.ansvarlig ringer/kontakter rekvirent og infeksjonsmedisiner. Hvis med.faglig.ansvarlig ikke er tilgjengelig/kan kontaktes/ikke tilstede skal bioingeniør kontakte rekvirent og infeksjonsmedisiner.
Infeksjonsmedisiner må kontaktes for behandling og ev. supplerende diagnostikk (eks. vurdere spinalpunksjon dersom positiv serumprøve og ukjent infeksjonskilde)
Negativt resultat:
- Negativ
Positivt resultat:
- Positiv
Følsomhetsbestemmelse: Behandling er i utgangspunktet empirisk og må starte med en gang på bakgrunn av positiv hurtigtest.
Meldingplikt og varslingsplikt
Ikke meldingspliktig til MSIS.
Varsling til kommunelege, Folkehelseinstituttet og andre instanser kan være aktuelt ved utbrudd.