Fagbioingeniør og spesialbioingeniør i bakteriologisk faggruppe II har ansvaret for etablering av stammebankdrift, samt bestilling av nye stammer. Fagbioingeniører og spesialbioingeniører i bakteriologisk faggruppe I og II har ansvaret for å ta opp stammer fra stammebanken, og utføre kontroller.
Bruk hansker og jobb i sikkerhetsbenk.
Sikkerhetsdatablad for stammene står i egen perm, merket: ALM-MM-STAMMEBANK, sikkerhetsdatablad stammebank. Denne permen oppbevares på puss-lab (rom B062).
Bestilling av stammer fra ATCC.
Stammene bestilles fra:
LGC Promochem AB:
Adr:
Nordic Region
LGC-Standards GmbH
Mercatorstrasse 51
46485 Wesel
Germany
Tlf: +49(0) 281 9887-0
E-post:
de@lgcstandards.com
Bestilling av stammer fra CCUG.
Der det er mest praktisk i forhold til pris og tilgjengelighet, kan det også bestilles stammer fra CCUG.
Adr:
Culture Collection, University of Gøteborg
Department of Clinical Bacterology
Guldhedsg.10
S- 413 46 Gøteborg
Boks 7193 SE-402 34 Gøteborg
Sverige
Tlf +46 (0) 31 342 4696
E-post:
order@domain
Diverse informasjon om bestilling, kundeavtaler, informasjon fra leverandøren og garantier finnes i permen merket: ALM-MM stammebank, stammebank 2017. Denne står på puss-lab (rom B062).
Referansestammene kommer i frysetørrede ampuller. Buljong og skåler tempereres til romtemperatur. Følg den instruksjon på infoarket som følger med hver enkelt stamme, når det gjelder type buljong, medium, atmosfære og holdbarhet ved –80 °C.
Referansestammene mottas frysetørret i ampuller, og de oppbevares mørkt og i kjøleskap frem til referansekulturen etableres. For å ha reklamasjonsrett må referansekulturen etableres innen angitt tidsramme som er oppgitt fra leverandøren.
Som oppbevaringssystem til nedfrysing av stammer brukes Microbank fra Pro-Lab Diagnostisk, levert av med-Kjemi AS. I hver eske er det 81 stk cryorør m/ skrukork med forskjellige farger, med tilsvarende farge på kulene. Hvert rør inneholder 25 keramikk-kuler og en spesiell cryopreserveringsløsning. Kulene er vasket og har en porøs karakter som gjør at mikrobene lett fester seg til kulens overflate. Microbanken er utviklet for å få ideelle lagringsmuligheter for mikroorganismer slik at de ikke endrer seg eller dør over tid i nedfrosset tilstand.
Sterile transferpipetter.
Hvert rør skal merkes med permanenttusj før arbeidet starter.
Forurenset kultur, eller at agar/buljongen er forurenset.
For tykk spredning kan føre til at det er vanskeligere å oppdage eventuell forurensing. NB! Spre slik at vi får enkeltkolonier. Se prosedyre ALM-MM-Mottak: Utsåingsteknikker
Etablering og nedfrysing av referansekultur:
Merking av microbankrør: ATCC/CCUG navn –og nummer, nedfrysingsdato, rør nr. og holdbarhetsdato.
I forkant fylles det ut en driftslog for hver stamme, ”driftslog for ATCC/CCUG -stammer”; Her føres ATCC/CCUG -navn –og nummer, frysedato, lot.nr, boksplassering, holdbarhetsdato og kontroll av vekst etter nedfrysing mm, dette skjema brukes til å registrere uttak av kuler fra stammebanken. Skjema er lagret på data under: I:\HNT - ALM Fellesområde\Driftsenheter\MM\Rapporter og registreringer\stammebank\Stammebank bokser fra 2017
Arbeid sterilt i mikrobiologisk sikkerhetsskap.
|
1 |
Åpne ampullen med den frysetørrede referansestammen |
|
2 |
Tilsett 0,5- 1,0,ml av glukosebuljong/BH-buljong (se anbefaling fra leverandør for hver stamme) til ampullen. Bland godt. |
|
3 |
Overfør flere dråper til en velegnet skål og spre på vanlig måte (denne spredningen er som en sikkerhet på vekst dersom det ikke vokser i buljongen). Tilsett resten av løsningen til buljong. Merk skålen og rørene som angitt ovenfor.med ATCC/CCUG navn–og nr., og dato. |
|
4 |
Inkuber skål og buljong ved den temperatur og atmosfære som er oppgitt av leverandør. Inkuberingstiden kan variere pga frysetørret tilstand og de forskjellige typer stammer. |
|
5 |
Når buljongen er blakket, og eller vekst på skål, spres buljongen over på skåler. Bruk den type skål som er oppgitt av leverandøren. Inkuber skålene ved temperatur og atmosfære som oppgitt fra leverandør. |
|
6 |
Åpne microbank-røret. Skrap av ferske kolonier fra skålen med øse og bland disse i væsken i røret. Blandingen skal være 3-4 McFarland. |
|
7 |
Lukk røret godt og bland ved å vende det 4- 5 ganger. IKKE bruk vortex-mixer. |
|
8 |
Åpne microbank-røret og sug av all cryopreserveringsløsningen med steril transferpipette. Dette er viktig, da det letter frigjøringen av kulene når disse skal tas opp og reduserer innfrysingstiden. Sistnevnte fører til redusert krystalldannelse og dermed redusert stress på bakterien. |
|
9 |
Lukk røret godt. |
|
10 |
Røret plasseres i riktig cryoeske, og plasseres i –80 °C fryseren (F4) på inkubatorrommet (rom B019), i hylle merket STAMMEBANK. |
|
11 |
Etter 1 døgn tas microbank-røret opp fra fryseren F4. Så ut en kule som kontroll på at referansekulturen vokser etter nedfrysing. NB!! Bruk cryoblokk |
Antall rør som fryses ned pr stamme avgjøres av hva stammen skal brukes til og hvor ofte det skal hentes opp en kule fra referansekulturen.
Det fryses ned et rør ekstra i forhold til beregnet bruk for hver stamme. Ekstrarøret lagres i en ekse merket ”Gullboks” som en reserve. Gullboksen oppbevares i -80 °C fryseren F431 rom B.37.07 (kjøl/frys) på med. biokjemi.
Arbeid utføres i mikrobiologisk sikkerhetsskap NB!! Jobb sterilt!
De stammer som brukes daglig og ukentlig til kvalitetskontroller, tas opp fra nedfrosset referansekultur, mandag hver 8. uke. Dette gjøres fortrinnsvis av stammebankansvarlig/kontrollansvarlig. Disse arbeidskulturene kan så subkultiveres inntil 7 ganger og spres hver mandag av den som har ansvaret for prøvemottak. De andre stammene tas opp ved behov av kontrollansvarlig.
Før opp i driftslogg ATCC / CCUG stammer hver gang det blir tatt ut en kule, eller om det er spesielle faktorer, for eksempel forurensing eller tap av kule på benk mm: I:\HNT - ALM Fellesområde\Driftsenheter\MM\Rapporter og registreringer\stammebank
Bruk ALLTID cryoblokk ved uttak av kuler fra nedfrosne referansekulturer, for å hindre at innholdet i rørene tiner. Stadig tining av referansekulturene, vil ødelegge/stresse cellene, og redusere holdbarheten.
|
1 |
Åpne røret og ta ut en kule med steril platinanål. Platinanål steriliseres mot åpen flamme. Platinanålen avkjøles ved å «trykke» den i en MacConkey agar. Dersom kulene sitter fast, kan røret slås lett mot bordflaten. Brenn av platinanålen etter bruk. Sett rørene tilbake i fryseren så raskt som mulig! |
|
2 |
Kuler som er tatt opp av røret, skal aldri legges tilbake igjen! |
|
3 |
Kulene føres over på egnet medium for gitte stamme, og spres med vanlig teknikk. |
|
4 |
Skålene merkes med ATCC/CCUG -nr -og navn og uttaksdato. De referansekulturene som skal subkultiveres hver mandag, merkes med romertall I ved uttak og deretter II, III osv til VII de neste ukene. |
|
5 |
Skålene med brukskulturene settes i et eget stativ, meket ”Referansekulturer, ukentlig subkultivering”. Stativet oppbevares i "vekk-sett"-kjøleskapet (kjøleskap K5). Stammene som er til fæcesdiagnostikk oppbevares blant fæcesprøvene. |