Arbeidsbeskrivelse

 

Ansvar

 

Fagbioingeniør faggruppe II har ansvar for vedlikehold av denne prosedyren.
Alle som sender/sår ut fæcesprøver har ansvar for å følge denne prosedyren.

 

HMS/sikkerhetsinformasjon

 

Selenitt er generelt kreftfremkallende, og kan gi fosterskade. Bruk derfor hansker, og jobb i sikkerhetsbenk. Fæcesprøver skal såes ut i sikkerhetsbenk.

 

Medisinsk indikasjon

 

Indikasjon for dyrkning av fæcesprøver ved primærdiagnostikk er mistanke om bakteriell gastroenteritt eller enterokolitt.

 

Standard dyrkningsanalyse omfatter dyrkning for å påvise Salmonella, Campylobacter, Yersinia og Shigella. De to førstnevnte er de vanligste årsakene til bakteriell gastroenteritt i Norge.

 

Analyse med tanke på å avdekke andre tarmpatogene bakterier kan være aktuelt ved spesielle kliniske opplysninger (se tabell under) eller ved ønske fra rekvirent.

 

 

Se ellers prosedyrer for de ulike fæcesanalysene.

 

 

Arbeidets gang

 

Kommentaren BEGDIA skal benyttes når prøven KUN er dyrket ved SL. Dvs når den ikke er/har vært sendt til SOH innenfor de siste 3 månedene. (Nytt funn er definert som >3 måneder). Sjekk historikk hos pasient. Sending av slike analyser, nevnt i tabell(er) under er såkalte helanalyser, det er opp til legene ved SOH og ev supplere us jfr kliniske opplysninger på prøver videresendt fra SL.

NB HUSK: At alle prøver som videresendes til SOH skal ha med en kommentar i lab. kommentarfeltet dersom det er utført dyrkning og/eller C. difficile us. ved SL.

Tabell 1.0 viser spesielle kriterier for sending til SOH:

Klinikk/spesielle opplysninger	Dyrkes ved SL	Sendes SOH
Ved opplysninger om langvarig diaré (>2uker) hos eldre i sykehjem/sykehus og hos immunsupprimerte pasienter. NB se kriterier ved dyrkning: Vær spesielt obs på prøver med spesielle kliniske opplysninger:	JA	JA. Dersom det er utført noen analyser ved SL; Oppgi i lab. kommentarfelt til SOH hvilke analyser som er utført.
For barn under skolealder (< 5 år), uavhengig av klinikk.	NEI	JA
Dersom tidligere KUN dyrket ved Levanger og kommentaren BEGDIA.	NEI	JA

Se også prosedyre for sending av slike prøver: ALM-MM-Prøvemottak; Rekvirering og sending av prøver til SOH

Tabell 1.1 Viser oversikt over hva som skal sendes og hva som utføres ved SL:

AKTUELLE AGENS	KLINIKK	PROSEDYRE	MEDIUM
EPEC/ETEC Enteropatogene E.coli	Prøver med kliniske opplysninger om diaré etter opphold i utlandet skal videresendes SOH for ETEC/EPEC-us.	SOH intern sendeprøve.	Cary Blair**)
EIEC Enteroinvasive E.coli	EIEC er enteroinvasive E. coli som er nært beslektet med Shigella flexneri og S. Sonnei. Vanligvis mild diaré, men enkelte pasienter kan få dysenteriliknende bilde med pussholdig, av og til blodig diaré, kraftige abdominalsmerter og feber.	SOH intern sendeprøve.	Cary Blair**)
EHEC Enterohemorragiske E.coli	Prøver med følgende kliniske opplysninger skal videresendes SOH for EHEC-us: -Mistanke om hemolytisk-uremisk syndrom (HUS) -Alle med blodig diaré/hemoragisk kolitt - Diaré hos barn under skolealder (< 5 år), hos eldre i sykehjem/sykehus, hos immunsuprimerte pasienter	SOH intern sendeprøve.	Cary Blair**)
Parasitter (egg, cyster)	Konferer mikrobiolog. Ved fravær av mikrobiolog sendes disse til SOH.	SOH intern sendeprøve.	Uten tilsetning
NORO-virus		SOH intern sendeprøve.	Uten tilsetning
Clostridioides difficile toksin	Diaré som følge av antibiotikabehandling.	Utføres ved SL CLOSTRIDIOIDES DIFFICILE_TOKSINPRODUSERENDE I FECES [LAB1233030139000]	Uten tilsetning
Salmonella spp., Yersinia spp., Shigella spp., og Campylobacter spp.		Utføres ved SL Tarmpatogene mikrober.	Cary Blair**)
Rota-og Adeno-virus	Hos barn (opptil 7 år) og eldre>65 år	SOH Intern sendeprøve	Uten tilsetning*

 

v  *Glass uten tilsetting i rom temperatur kan benyttes dersom transport <1 time. Dette vil stort sett gjelde for pasienter som er inneliggende på sykehuset Levanger, og på prøver som blir bringt laboratoriet rett etter prøvetaking. Ved utsæd etter >1 t må prøven oppbevares i kjøleskap (inntil 24 t).

v  **Cary Blair transportmedium dersom transport i rom temperatur >1 time. Ved utsæd etter >24 t må prøven oppbevares i kjøleskap (inntil 48 t).

v  For klargjøring og sending av disse prøvene se under kapittel: Svarrapportering.

 

Valg av skåler/buljonger ved spørsmål om tarmpatogene mikrober:

 

Tabell 1.2: Viser valg av medier og inkubering:

KLINIKK/MIKROBE	XLD, 35°C	CIN, 29°C	*CCDA 42°C, mikroaerofilt	SEL-bulj.,35°C	SEL-bulj.,22°C
Patogene tarmbakt.	X	X	X	X	X
Kontrollprøver til tidligere positive prøver:
Salmonella/Shigella ktr*)	X	X	X	X	X
Campylobacter ktr*)	X	X	X	X	X
Yersinia ktr*)	X	X	X	X	X

*) Ved kontrollprøver til tidligere positive prøver skal øvrige patogene tarmbakterier tas med.
*) Ved spesielle kliniske opplysninger skal CCDA-agar også dyrkes ved 35 °C. Se under: Spesielle kliniske opplysninger

 

Tabell 1.3; Viser spesielle forhold vedr. godkjenning av rekvisisjon og prøvemateriale:

●	Kontroller at navn og fødselsdata på rekvisisjon og prøve stemmer overens.
●	Bioingeniør som analyserer fæcesprøver, skal gå gjennom rekvisisjonene før/etter innregistrering.
●	Bioingeniør vurderer rekvisisjon i henhold til rekvirerte us. og kliniske opplysninger. Hvis klin. opplysninger mangler, legg inn kom: .KLOM Kliniske opplysninger mangler. Hvis kliniske opplysninger gir grunnlag for andre us. enn de rekvirerte, konferer med medisinskfaglig rådgiver evt. rekvirent. Sletting av rekvirerte us. kan utføres dersom de er uaktuelle i henhold til klinikk.
●	Alle prøvekommentarer som kan legges inn når prøven registreres, legges i rekvisisjonskommentar feltet.
●	Når mottatt fæcesprøve er Rekvirert i ROS som u.s: Annet, og klinikk tilsier tarmpatogene: 1.       Legg til prosedyre; Diaréfremkallende agens. 2.       Gå deretter til resultatregistrering, besvar Annet som utført. VIKTIG: Prosedyren Annet skal IKKE avbrytes.

 

Ved mottatt fæcesprøver sendt på glass uten tilsetning fra primærhelsetjenesten (og det er rekvirert patogene tarmbakterier), legg til kommentaren:

.FGUP: Fæcesprøve sendt på glass uten preservering. Kan gi falsk negativ dyrkning. Bør sendes på Cary-Blair medium.

Er prøven ≥ 3 dager såes prøven ut, ta med følgende kommentar:

v  .TRA: Transporttid over 3 døgn kan føre til falsk negativ dyrkning

v  .NYPA: Ny prøve anbefales.

Er prøven > 4 dager eller eldre skal den ikke sås ut. Avbryt test og besvares da som over.

Kommentaren(e) skal legges inn i rekvisisjonsoppføring under fanen rekv.kommentar.

 

Clostridioides difficile

 

Se: ALM-MM-PCR; Påvisning av Clostridioides difficile toksin B (tcdB) BD MAX (Ikke tilgjengelig)

 

Analyseutstyr og klargjøring av disse

 

Skåler og buljonger som skal benyttes ved utsæd av fæcesprøver:
1 stk XLD-agar
1 stk CIN-agar
1 stk CCDA-agar
Selenittbuljong 2 stk.

 

Alle skåler skal romtempereres før utsåing/bruk.

Selenittbuljong oppbevares i romtemperatur og er klar til bruk.

 

Vær spesielt obs på prøver med spesielle kliniske opplysninger:

 

Ved opplysning om langvarig diaré (>2 uker) hos: eldre i sykehjem/sykehus og immunsupprimerte pasienter.

Fæcesprøve SKAL da såes ut på 2 CCDA-skåler. For å kunne inkubere i 2 ulike temperaturer.

 

Immunsupprimerte – betegnelse benyttet om en person med nedsatt motstandskraft mot sykdommer av ulike årsaker, for eks.:

v  Gravide. (Er ikke def. som sykdom, men pga at graviditet er en spesiell situasjon
hvor infeksjoner krever stor oppmerksomhet og detaljert oppfølging av
mor og foster, og kan derfor representere en diagnostisk utfordring.)

v  Svært underernært eller de med anoreksi,
malign sykdom eller annen fremskreden kronisk sykdom

v  Behandling med cytostatika eller steroider i høy dose over et lengre tidsrom, immunsuppresjon

v  Lavt granulocytt tall uansett årsak

v  Har fått diagnosen AIDS etter gjeldende definisjon

 

Inkubering (husk internkontroll):

v  Skålene settes sammen med GENbox mikroaerofile konvolutter
i egne kolber/bokser og inkuberes ved 42°C.

v  For dyrkning i 35 °C:
Skål settes sammen med GeNbox-mikroaerofile
konvolutter i egne kolber/bokser, husk; skriv på agar 35 °C,
inkuberes ved 35°C, kolbe settes
i skap sammen med salmonella dyrkning.

v  Inkuberes i 2 døgn.

 

Usikkerhetsbidrag, feilkilder og interferens

 

For lang transporttid kan føre til at bl.a Shigella-/ Campylobacter- bakterier i prøven dør.
Se også under de enkelte fæces prosedyrene for usikkerhetsbidrag, feilkilder og interferens.

 

Fremgangsmåte/Utførelse av analysen

 

Utsåing av fæces skal utføres i sikkerhetsskap iført gul smittefrakk og hansker.

 

1.	Lapp alle skåler og rør med etiketter.
2.	Fæcesprøver som også skal til parasitt, NORO virus eller eventuelt andre undersøkelser som ikke gjøres ved vår avdeling, sås ut så raskt som mulig, slik at prøven(e) kan sendes SOH så fort som mulig.
3.	Cary Blair glasset blandes godt (eventuelt på vortexmikser) før utsæd for å få en jevn suspensjon.
4.	Drypp en dråpe av suspensjon på hver skål og spre med øse slik at vi oppnår enkeltkolonier.
5.	Tilsett ca 0.5 ml suspensjon til hvert av 2 selenitt-rør.

 

v  CIN-skåler settes i stativ med hette over og inkuberes ved 28°C.

v  XLD-skåler settes i stativ med hette over og inkuberes ved 35°C.

v  Selenittbuljong settes i stativ og inkuberes sammen med XLD-skålene.

v  Den andre selenittbuljongen inkuberes ved 22°C (romtemperatur).

v  CCDA-skåler settes i en kolbe og pakkes umiddelbart med GenBox mikroaerofilt. Inkuberes ved 42°C. Husk internkontroll.

 

Vurdering

 

Se under de enkelte fæcesprosedyrene.

 

Svarrapportering

 

ALM-MM-Admin; Svarrapportering ved Lab. for medisinsk mikrobiologi.

Sendeprøver til St. Olavs Hospital se: ALM-MM-Mottak; Sending av prøver