Spesialbioingeniør, faggruppe I, har ansvar for vedlikehold av denne prosedyren. Alle bioingeniører som er opplært i denne prosedyren har ansvar for at prosedyren blir fulgt.
Medier: Brucellaagar, MH-agar, MH-agar med β-NAD og MH-sjokoladeagar blir kontrollert av leverandør og bør ha en dybde på 4,0 ± 0,5 mm. Det skal ikke være synlig fukt verken på agarens overflate eller i lokket før bruk. Agarskålene kan tørkes over natt i romtemperatur eller ved 35°C, med lokket av, i 15 minutter. Agarskålene skal ha romtemperatur før de tas i bruk. Medie og suspensjonsmedium vil være avhengig av mikrobe se vedlegg MIC.bestemmelse medier og inkubasjon
MIC Test Strips (MTS): Stripsene består av høykvalitetspapir som er impregnert med en predefinert gradient av antibiotika over papirstrips tofoldsfortynningstrinn. Stripsene har lang holdbarhet ved riktig lagring (-20 °C til 8 °C) og oppbevares i fryser RTB062. Stripsene er pakket enkeltvis i en pose med tørkemiddel.
· For høy eller for lav suspensjon
· Urent bakterieisolat
· Feil agardybde
· MTS, agarskåler, saltvann, anaerob-buljong eller MH-buljong har ikke blitt romtemperert
· Fuktige agarskåler
· MTS har blitt tint og fryst flere ganger
· MTS har blitt eksponert for varme, fukt eller lys
· Holdbarheten på MTS
· For mange skåler i høyden. Kan gi ujevn fordeling av temperatur
På mikrober hvor inkubasjonstiden er 16-20 timer bør resistensoppsettet utføres etter kl. 11.00. På mikrober hvor inkubasjonstiden er over 24 timer kan resistensoppsettet utføres før kl. 11.00.
Aktuelle isolater: MIC-bestemmelse benyttes ved alvorlige infeksjoner som sepsis, meningitt, hjerneabcesser eller invasive bløtdelsinfeksjoner. Det benyttes også for anaerobe bakterier, bakteriearter hvor lappediffusjon ikke er egnet (f.eks gonokokker), samt bakteriearter hvor det mangler kliniske brytningspunkt. Se ALM-MM-Res; Avlesning av mikrober uten brytningspunkt
Inokulat: Lag en bakteriesuspensjon, se vedlegg MIC.bestemmelse medier og inkubasjon for hvilket suspensjonsmedium og turbiditet som skal brukes. Bruk alltid densitometer for å måle turbiditet. Husk å trekk fra egenfargen på buljongen. Bruk flere (4-5) morfologiske like kolonier, når mulig, for å unngå å velge en atypisk variant. Inokulatet bør brukes innen 15 minutter etter tillaging. Klem ut væske fra bomullspinnen mot kanten av røret for å fjerne overskuddsvæske. Dersom man skal bruke samme bakteriesuspensjon på flere agarskåler, husk å dyppe bomullspinnen mellom hver skål. La overskuddsfukt absorbere, pass på at overflaten er helt tørr før MTS påfører.
MIC Test Strips (MTS): Den uåpnede aluminiumsposen bør stå i romtemperatur i omtrent 30 minutter før bruk. Legg stripsen på agaroverflaten med MIC skalaen opp. Trykk stripsen mot agarflaten slik at hele gradientens lengde er fullstendig i kontakt med agaroverflaten. MTS må ikke flyttes etter at den er lagt på. Små agarskåler har plass til 2 MTS som legges med enden (navnekoden) hver sin vei.
Inkubering: Skålene skal inkuberes opp-ned. Ikke plasser mer enn 5 skåler i høyden, før det lages et mellomrom. For oversikt over inkubasjonsforhold og inkubasjonstid se vedlegg MIC.bestemmelse medier og inkubasjon.
Dersom mikroben skal inkuberes mer enn 20 timer må det noteres tidspunktet resistensbestemmelsen blir satt opp på reseistensskålen og på primærskålen. Dette gjelder vancomycin på enterokokker og stafylokokker, anaerobe bakterier, campylobacter sp., capnocytophaga, pasturella, meningokokker og HACEK-gruppen.
Avlesning: Resistensskålen skal ha jevn konfluerende vekst slik at sonene lett kan avleses. Les av MIC-verdien der ellipsens kant skjærer strimmelen. Rund alltid opp dersom skjæringspunktet havner mellom to verdier. Forhøy alltid halve MTS fortynningsverdier til nærmeste tofoldsfortynningstrinn før tolkning av resistenskategori. Lest av to desimaler, en MIC-verdi på 0,125 µg/L skal rapporteres som 0,12 µg/L.
For kombistrips (ESBL-tester) skal MIC-verdien avleses direkte der randen av ellipsens kant skjærer strimmelen. MTS ESBL skal kun brukes som konfirmasjonstest og ikke for å bestemme mikrobens MIC. Se også ALM-MM-Res; ESBL av Enterobacterales, Pseudomonas sp, Acinetobacter sp
Baktericide midler: Ta hensyn til slørvekst og enkeltkolonier som står nær stripsen inne i hemningssonen.
Bakteriostatiske midler: Les av ved 80-90 % hemming eller der veksten er betydelig hemmet. Eksempler på dette er clindamycin, erytromycin, fucidin, tetrasyklin, kloramfenikol, linezolid, tigecyklin, trimetoprim og sulfonamider. Se oversikt i MIC Test Strip Technical sheet Cidal-Static
Dersom det er ujevn sone/forskjell på hver side av stripsen, les av den høyeste verdien. Dersom diskrepansen er > 1 fortynningstrinn må testen repeteres. Dersom følsomhetsbestemmelsen er vanskelig å vurdere pga. slørvekst kan det være nødvendig å reteste isolatet med pre-inkuberte agarskåler. Slørvekst kan oppstå dersom agarskålen har fuktig overflate, det er fukt i lokket ev. inneholder for mye fuktighet i selve agaren.
Vekst langs hele stripsen vurderes som > høyeste verdi på stripsen. Vekst under laveste verdi vurderes som < laveste verdi på stripsen.
For bilder av ulike soner se Liofilchem MIC Test Strip Photographic Guide
Bruk NordicAST sin brytningspunkttabell.
For mikrober som ikke har etablerte brytningspunkt se ALM-MM-Res; Avlesning av mikrober uten brytningspunkt