Hensikt
Hensikten med denne prosedyre er å sikre kvalitetsmessig og riktig analysering og vurdering av celler i kroppsvæsker analysert på Sysmex XN.
Omfang
Gjelder alle ansatte ved Avdeling for Laboratoriemedisin som er godkjent for å analysere prøver på Sysmex XN.
Grunnlagsinformasjon
HISTORIKK
Celler i spinalvæske har blitt telt manuelt i alle år.
Etter at CellDyn ble tatt i bruk ble leukocytter i spinalvæske > 20.106/L gitt ut fra denne. (Levanger fra 2002 og Namsos fra 2006). Telling av celler i andre kroppsvæsker har blitt utført på samme måte.
Sysmex XN-1000 ble tatt i bruk i 2015. 15/5-19 ble også Sysmex XN-1500 tatt i bruk for telling av celler i kroppsvæsker.
ANALYSEPRINSIPP
Erytrocytter telles i RBC-kanalen ved hjelp av sheath flow impedanse-teknologi.
Leukocytter telles i Diff-kanalen (WDF) ved hjelp av fluorescens flowcytometri:
”Forward Scatter” lys, FSC, (mål for cellestørrelse) kombineres med ”Side Scatter” lys, SSC, (mål for indre kompleksitet av cellen) og ”Fluorescens-intensitet”, SFL, (mål for DNA/RNA innhold)
Høyt-Fluorescerende celler (HF-BF) rapporters også for spinalvæsker. Slike celler kan f.eks være makrofager, lymfomceller eller mesothelial-celler. De finnes over populasjonen med mononukleære celler i scattergrammet som blåe punkt. De inkluderes ikke i leukocytt-tellingen, men er med i total-celle-tellingen (TC-BF).
MEDISINSK INDIKASJON
Celletelling i kroppsvæsker blir utført for å avdekke sykdom (infeksjoner, inflammasjoner, blødning eller ondartede tilstander) og følge behandlingseffekt.
I spinalvæske utføres celletelling ved mistanke om meningitt eller leukemiske foci og intrakranielle blødninger.
I leddvæske kan celletellingen være til hjelp for å skille mellom inflammatorisk og ikke-inflammatorisk tilstand i ledd, samt å vurdere om det foreligger bakteriell artritt.
REFERANSER
1. Manual for Sysmex XN, Rev. Februar 2012
2. Manual for Sysmex XN, Rev. August 2017
3. Fleming et al.: Validation of the Body Fluid Module on the new Sysmex XN-1000 for counting blood cells in Cerebrospinal Fluid and other Body Fluids. Clin Chem Lab Med 2012:50 (10): 1791-1798.
4. Brukerhåndbok i Medisinsk Biokjemi. Petter Urdal, Atle Brun og Arne Åsberg 4.utg 2009
5. Söderquist B, Jones I, Fredlund H, Vikerfors T. Bacterial or crystal-associated arthritis? Discriminating ability of serum inflammatory markers.
Scand J Infect Dis 1998;30:591-6.
6. Margaretten ME, Kohlwes J, Moore D, Bent S. Does this adult patient have septic arthritis? JAMA 2007;297:1478-88
METODENS YTELSE
Måleområde:
BF- Leukocytter: 5 – 10 000 x 106/L
BF- Erytrocytter: 1000 – 5 000 000 x 106/L
Hvis telletallet er utenfor måleområdet blir svaret markert med @. Prøven må da fortynnes med Cellpack og reanalyseres i Body Fluid-mode. Selv om telletallet er i samme område som fullblod skal ikke prøven analyseres i WB (fullblodsmodus).
Analytisk usikkerhet:
|
BF-Leukocytter: |
CV ≤ 30,0% ved leukocytter= 5-15 x 106/L |
|
CV ≤ 15,0% ved leukocytter= 16-30 x 106/L |
|
|
CV ≤ 10,0% ved leukocytter= 31-50 x 106/L |
|
|
BF-Erytrocytter: |
CV ≤ 40,0% eller maks ≤ 7000 x 106/L ved RBC mellom 3000 og 50000 x 106/L
Se for øvrig valideringsrapport ALM-MB-Hem; Validering av SYSMEX XN-1000 (Ikke tilgjengelig) Del 2 |
STANDARDISERING
Ingen egen kalibrering for Body Fluid, korrekte telletall oppnås ved korrekt CBC- og DIFF kalibrering.
Se ALM-MB; Sysmex XN.
KVALITETSKONTROLL
XN Check BF Level 1
Leveres av Sysmex Norway NUF
Uåpnet rør: Til oppgitt holdbarhetsdato
Åpnet rør: 30 dager
Kontrollen analyseres hver morgen.
Arbeidsbeskrivelse
ANSVAR
Fagbioingeniør og /eller spesialbioingeniør er ansvarlig for at instrumentet fungerer og at prosedyren er oppdatert.
Alle som har Sysmex som arbeidsoppgave er ansvarlig for å gjøre seg kjent med, og følge prosedyren etter opplæring. Den enkelte skal også forsikre seg om at instrumentet er i orden ihht prosedyrene før analysering.
HMS
Viser til ALM-MB; Sysmex XN
Prøvemateriale
Instrumentet er validert for å analysere fem typer kroppsvæsker og alle disse har egne analysepakker i RoS og Beaker:
• Spinalvæske (Sp-)
• Ascitesvæske (Asc-)
• Pleuravæske (Plv-)
• Leddvæske (Ldv-)
• Dialysat (Di-)
Analysepakkene inneholder
• Leukocytter, total
• Mononukleære Leukocytter (lymfocytter og monocytter)
• Polymorfnukleære Leukocytter (granulocytter)
• Erytrocytter (ikke i dialysat)
Andre kroppsvæsker kan også analyseres, disse rekvireres da som X-Celletelling. På disse må kommentaren IKSTAN (Mottatt materiale: xxx. Prøven er analysert med en metode som ikke er validert for dette prøvematerialet. Laboratoriet kan derfor ikke dokumentere gyldigheten eller den medisinske betydningen av resultatet.) brukes som analysekommentar.
Spinalvæske analyseres helst i glass 2 for å unngå blodtilblanding fra stikket.
Leddvæske skal tilsettes hyalase før analysering. Se Fremgangsmåte.
Holdbarhet
Celler i spinalvæske/andre væsker er ikke stabile og prøven må derfor analyseres så raskt som mulig og helst innen 30 min til 1 time etter prøvetaking.
Reagenser
På instrumentet benyttes samme reagenser som til CBC og DIFF.
Hyalase (Hyaluronidase 1500 I.U. fra Wockhart. Bestilles på apoteket.) brukes som tilsetning til leddvæske for å løse opp hyaluronsyre som gjør leddvæsken viskøs.
Uoppløste ampuller finnes i skap ved siden av kjøleskapet i hematologikroken på Levanger og i øverste skuff på hematologien på Namsos.
En ampulle Hyaluronidase løses i 2 mL dest vann. Fordeles i Eppendorfrør (100 µL i hver) og oppbevares i fryser K408 (Levanger) og F301 (Namsos).
Feilkilder og interferens
• Blod fra innstikket
• Mye cellefragmenter/ ødelagte celler i prøven
• Mye bakterier eller sopp i prøven
• For lang henstand av prøven før analysering
• For dårlig blanding av prøven før analysering
• For viskøs prøve
FREMGANGSMÅTE
Væsker MÅ analyseres i Manuell mode, uten kork!
Sjekk at det er kjørt en BF-kontroll samme dag. Hvis ikke må det kjøres en BF-kontroll før prøven kan analyseres.
Leddvæske skal alltid tilsettes Hyalase (Hyaluronidase) før analysering. Dette skal gjøres så fort prøven mottas:
• Hyalase finnes nedfrosset i fryser K408 (Levanger) og F301 (Namsos). Tin et rør når leddvæske mottas. Dette kan brukes resten av dagen.
• Tilsett 10 µL hyalase pr mL prøve i prøveglasset (bruk skjønn)
• Bland godt, gjerne på vippe!
• La glasset stå i 15 minutter
• Bland godt før analysering på Sysmex
Analysering
For utførelse, se ALM-MB; Sysmex XN.
Alle Body-Fluid-prøvene skal analyseres uten kork! Gjelder også kontrollene.
Instrumentet utfører automatisk en bakgrunnstest etter åpning av Body Fluid mode. Dersom den ikke blir godkjent første gang må den gjentas.
Automatisk akseptable verdier for BF-bakgrunnssjekk:
WBC-BF: 1 x 106/L
RBC-BF: 3000 x 106/L
Dette er høyere enn det vi selv har satt som nedre deteksjonsgrense. Derfor må vi sjekke i Lab Only at bakgrunnsverdien er RBC-BF2 < 300. Hvis bakgrunn > 300 må det gjøres en ny. (Kjør en «blank»-analyse/luft; ved å ta bort haken ved Tube Sensor og skriv «blank» i Sample No eller bytt til WB-mode og tilbake igjen).
Tiltak dersom bakgrunnssjekken ikke går inn etter flere forsøk: Slå instrumentet av og på igjen.
Utskrift:
I Graph-skjermbildet- velg Output - Report for Lab Use only.
Utskriften kommer på Sysmex-skriveren. Der kan en se RBC-BF2, som er det svaret som gis ut.
Svarrapportering:
Alle væsker blir stoppet for validering i EPU før de sendes til Beaker.
Spinalvæske:
Online overføring av svar på væsker (Sp-, Asc-, Plv-, Lv-, Di-):
|
Analyse |
Svar på Sysmex/EPU |
Gis ut som i Beaker |
|
WBC |
< 5 . 106/L
|
< 5 . 106/L |
|
> 5 . 106/L |
Eksakt tall m/ diff. fordeling i %
|
|
|
MN |
Gis ut i %.
|
Gis ut i %. Dersom WBC < 5 . 106/L slettes MN/PMN og kommentaren «Fordelingen mellom mononukleære og polymorfnukleære celler gis ikke ut når LPK < 5 . 106/L» legges på WBC-svaret. |
|
PMN |
Gis ut i %.
|
|
|
RBC |
< 1000 . 106/L |
< 1000 . 106/L (RBC-BF2 i Lab Only) Kommentar: «Referanseområdet for Sp-Erytrocytter er < 5 x 10**6/L, men denne metoden kan ikke kvantitere erytrocytter < 1000 x 10**6/L.» Dette skjer automatisk i Beaker.
|
|
> 1000 . 106/L |
Eksakt tall (RBC-BF2)
|
På «Lab Only» kommer en parameter som HF-BF, dette kan være høytfluorescerende celler som ikke er leukocytter, men celler fra andre patologiske tilstander relatert til spinalkanalen dersom det er spinalvæske. (Sees ved borelliose, cancertilstander som lymfomer, ALL etc.)
Disse sees høyt i WDF-scattergrammet som blåe prikker.
Om det er høyfluorescerende celler tilstede i spinalvæske, > 6,9% og WBC > 5.109/L, skal dette gis ut som en kommentar (HFBF) ved WBC: «Det er påvist kjerneholdige celler som ikke er leukocytter».
Høytfluorescerende celler skal kun tas hensyn til på spinalvæske – ikke andre væsker!
Dersom WBC > 6 og RBC> 3000 kommer denne kommentaren i Beaker: «Tilstedeværelse av leukocytter i spinalvæsken kan av og til skyldes blodtilblanding (innstikksblødning eller annen blødning). Hvis det er tilfelle, vil man forvente at forholdet mellom erytrocytter og leukocytter i spinalvæsken er omtrent det samme som i pasientens blod, vanligvis > 500-1000 erytrocytter per leukocytt».
Resultatvurdering
Se alltid nøye på scatterplottene (spredningsskjema) før resultatene godkjennes. En * (eller W i Enhanced View i EPU) bak dataene viser at det er noe mistenkelig eller unormalt. Sjekk flagg-meldinger.
Flagging i BF mode
Det kommer bare ett flagg fra instrumentet ved analysering i BF-mode: WBC Abn Scattergram.
Dette kan skyldes interferens fra ødelagte celler, bakterier, sopp, abnormale celler, dårlig skille mellom mononukleære og polymorfnukleære celler eller tilstedeværelse av høytfluorescerende celler (HF-BF).
• Hvis instrumentet ikke greier å skille mellom mono-/poly- celler, er det totale antall leukocytter riktig, men diff/fordeling kan ikke gis ut.
• Hvis det er høytfluorescerende celler tilstede er det totale antall leukocytter riktig, se Svarrapportering.
• Hvis årsaken kan være interferens (ses som dårlig skille mellom Ghost (blå «sky» nederst) og WBC) kan man prøve å fortynne prøven.
• Hvis instrumentet bare viser en grå «sky», også etter fortynning av prøven, må rekvirenten gis beskjed om at celletelling ikke er mulig.
tolkning
Henviser til LPK (Leukocytt partikkelkonsentrasjon) og EPK (Erytrocytt partikkelkonsentrasjon) (Spinalvæske).
Ofte stilte spørsmål (FAQ)
• Hva gjør vi hvis bakgrunnen er > 300.106/L på EPK?
Gjør en ny bakgrunn, utføres ved å sette instrumentet i fullblodsmodus (WB) og tilbake i BodyFluid (BF) eller kjøre «blank-prøve» ved å hake bort Tube Sensor.
• Når skal kommentaren «IKSTAN» brukes?
Brukes på andre væsker enn Sp-, Asc-, Plv-, Lv-, Di-.
Referanseområde/beslutningsgrenser
Se
LPK (Leukocytt partikkelkonsentrasjon) og EPK (Erytrocytt partikkelkonsentrasjon) (Spinalvæske) og
LPK (Leukocytte partikkel konsentrasjon ) og EPK (Erytrocytt partikkel konsentrasjon) (Dialysat og væsker)
Referanser LPK:
Spinalvæske:
Barn:
Kestenbaum, L.A., et al., Defining cerebrospinal fluid white blood cell count reference values in neonates and young infants. Pediatrics, 2010. 125(2): p. 257-64.
Voksne:
Fleming, C., et al. Clinical relevance and contemporary methods for counting blood cells in body fluids suspected of inflammatory disease, 2015.
Relativ fordeling av hvite:
Dean A. Seehusen, M.D., Mark M. Reeves, M.D., and Demitri A. Fomin, M.D., Tripler Army Medical Center, Honolulu, Hawaii. Cerebrospinal Fluid Analysis, Am Fam Physician. 2003 Sep 15;68(6):1103-1109
Dialysat: ISPD (International Society of Periotineal Dialysis) Guidelines, ISPD Peritonitis Recommendations 2016 Update on Prevention and Treatment
Ascitesvæske: Kjeldsberg, C.R. and J.A. Knight, Body Fluids. 2nd edition ed. 1986, Chicago: American Society of Clinical Pathologists Press
Leddvæske: Tidsskr Nor Lægeforen 1990; 110:3246-7
Pleuravæske:
Noppen, M., et al., Volume and cellular content of normal pleural fluid in humans examined by pleural lavage. Am J Respir Crit Care Med, 2000. 162(3 Pt 1): p. 1023-6.
Light, R.W., Pleural Diseases. Fourth edition ed. 2001, Philadelphia, PA: Lippincott Williams & Wilkins
Referanser EPK:
Spinalvæske:
Renard D, Thouvenot. CSF RBC count in successful first-attempt lumbar puncture: the interest of atraumatic needle use. Neurol Sci 2017; 38:2189-93
Herlev og Gentofte Hospital; Referenceinterval/kliniske beslutningsgrænser