Arbeidsbeskrivelse

Ansvar

Seksjonsleder på blodbanken i samarbeid med medisinskfaglig rådgiver  fra St. Olavs Hospital er ansvarlig for at den teknikken og de reagensene som brukes er validert og godkjent av norske helsemyndighter. Den fagbioingeniør som er delegert ansvaret for svangerskapsanalysene, er ansvarlig for at prosedyren holdes oppdatert.

HMS/sikkerhetsinformasjon

Konserveringsmiddel er 0.1 % NaN3. 

Alle reagenser og pasientprøver skal behandles som potensiell infeksiøs.

ARBEIDETS GANG

Prøvematerialet og bearbeidelse av dette

Sentrifugert EDTA-plasma. CPD-A-plasma og serum kan også brukes. Holdbarhet 7 dager i kjøleskap.

Prøvemateriale til retitrering oppbevares i fryser.

Reagenser og klargjøring av disse

Coombs Anti-IgG gelkort, Ref.nr.: 004024, 004025 og 004026. Produsert av BioRad.

Diluent pH 7, varenr.: Tv 001. Produsert av Labex.

Alle reagenser leveres av Norsk Labex.

For plassering av reagenser: Se egen reagensoversikt.

Reagensene må ha romtemperatur før de brukes.
Alle kort som brukes inspiseres. Kort som er uttørket, har luftbobler i gelen eller skadet folie brukes ikke.

Analyseutstyr og klargjøring av disse

Cellevaskerør 12x75 mm.

Godkjent pipette.

DiaMed ID-Incubator.

DiaMed ID-Centrifuge.

Feilkilder og interferens

Bakteriell eller annen kontaminasjon av prøver eller reagenser kan gi falske positive eller negative reaksjoner.

For sterke eller for svake cellesuspensjoner kan gi feil resultat.

Valg av titreringsceller

Vi titrerer mot celler som er homozygote på det aktuelle antigenet.

Hvilke celler bruker vi til titrering i Rh-systemet? Anbefalinger fra Veileder utgave 7.3 2017

ANTISTOFF	TITRERINGSCELLER
Anti-D	C-D+E+c+e- (R2R2)
Anti-E	C-D+E+c+e- (R2R2)
Anti-C	C+D+E-c-e+ (R1R1)
Anti-c	C-D-E-c+e+ (rr)
Anti-e	C-D-E-c+e+ (rr)
Anti-K	Heterozygote celler, vanskelig å finne homozygote.

Hvis det er flere antistoff hos samme pasient, må det velges erytrocytter som er positive mot det antistoffet det skal titreres mot og negativ mot de andre antistoffene som pasienten har.

Ved antistoffer i kombinasjon må man av og til bruke heterozygote celler, f.eks:

Anti-C+D: Anti-C titreres mot C+D-E-c+e+ (r`r) og anti-D mot C-D+E+c+e- (R2R2).

Er anti-C titeret høyere enn anti-D, bør dette utredes med tanke på anti-G.

Anti D+E: Anti-D titreres mot C+D+E-c-e+ (R1R1) og anti-E mot C-D-E+c+e+ (r"r).

Anti-c+E: Anti-c titreres mot C-D-E-c+e+ (rr) og anti-E mot C+D+E+c-e+ (R1Rz). Alternativet er å titrere felles mot C-D+E+c+e+ (R2r) dersom C+D+E+c-e+ (R1Rz) ikke er tilgjengelig.

Anti-C+e: Anti-C titreres mot C+D+E+c+e- (R2Rz) og anti-e mot C-D-E-c+e+ (rr). Alternativet er å titrere felles mot C+D+E-c-e+ (R1R1) dersom C+D+E+c+e- (R2Rz) ikke er tilgjengelig.  

Fremgangsmåte/Utførelse av analysen

Rekvirer analyse Blodtypeantistofftitrering i Beaker.

Første gang et antistoff titreres i svangerskapet, skal det titreres av 2 bioingeniører som setter opp titreringsrekke helt uavhengig av hverandre. Ved retitrering lages det en titreringsrekke av hver prøve.

Oppsett av titreringsrekke

• Merk cellevaskerør med titertallene fra 1-32 (evt. lenger)
• Sett opp en tofolds fortynningsrekke med 100μl plasma/Diluent pH 7 (1/1--1/2--1/4--1/8--1/16--1/32, evt. lenger ved behov)
• Hvert enkelt glass inneholder da prøvemateriale for titreringen

Titrering med LIAT-teknikk

Framgangsmåte

• Merk gelkort av typen Coombs Anti-IgG med venstreetikett fra Beaker og titertall fra 1-32 (eller lenger)
• Tilsett 50 μl blodlegemeoppslemming til hver brønn. Vi bruker blodlegemer fortrinnsvis fra screeningpanelet. Disse skal være homozygote i forhold til det aktuelle antigenet. Hvis vi ikke har en passende celle i screeningpanelet, bruker vi en celle fra ID-panelene Resolve B eller C. Vi bruker ikke celler fra ID-DiaPanel fordi vi da kan risikere at det blir tomt for ei celle
• Tilsett 25 μl prøvemateriale fra titreringsrekka til hver brønn
• Inkuber 15 min. ved 37˚ C i gelkortinkubator
• Sentrifuger i gelkortsentrifuge

Avlesning

• Les av kortene i godt lys, avlesning fra begge sider
• Kortet kan ikke leses av på ID-Reader. For å sikre dokumentasjon tar vi kopi av kortet i kopimaskina med full farge. Scan deretter bildet i Beaker. Husk å scan med farger
• Før resultatet på skjema ALM-BB-L; Svar antistoff gravide
• Titeret angis som nevneren i fortynningen i den siste brønnen med påvist reaksjon, dvs. der styrken av reaksjonen angis til + (en pluss)

Utgivelse av svar

Titersvaret legges inn i Beaker. Eksempel: Titer 8 legges inn som tall i svarkolonnen. Beaker gjør om dette selv til 1:8. Verifiser svar.

Definisjon av kritisk titerstigning: En økning på 2 trinn siden forrige prøve.

Ved kritisk titerstigning kontaktes vakthavende lege ved AIT/SOH for anbefaling om videre oppfølging. Vi ringer aktuell rekvirent. Det skal dokumenteres i Komm.logg hvem som tar imot beskjed. 

Godkjenning av svar

"Svar antistoff gravide" legges i konvolutten merket med pasientens navn og fødselsdato i skuff på blodtypelab. Når prøven er ferdig besvart, arkiveres den på fødselsnummer.

Titersvaret legges inn som en del av besvarelsen på screening i ProSang.
Det er pr. idag ikke mulig å lese titreringene på ID-reader.

Svarrapportering

Konvolutten med pasientens svar legges i skuff på blodtypelab. Endelig beskrivelse utføres av driftsleder eller en annen bemyndiget person, eventuelt i samarbeid med vakthavende lege ved AIT, SOH.