Arbeidsbeskrivelse

FLYTSKJEMA

1.      Prøvemateriale og bearbeidelse av dette

2.      Reagenser og klargjøring av disse

3.      Fremgangsmåte / utførelse av analysen

4.      Vurdering av svar

5.      Referanseområde

 

ANSVAR

Fagbioingeniør og/eller spesialbioingeniør på faggruppe 1 er ansvarlig for at opplæring blir gitt og at prosedyren er oppdatert. Den enkelte er ansvarlig for å gjøre seg kjent med prosedyren og følge denne.

 

HMS/sikkerhetsinformasjon

Alle biologiske prøver skal behandles som potensielt smittefarlig. Se prosedyre for Usterile engangshansker. Valg og bruk av usterile hansker.

 

Gode rutiner i forbindelse med prøvetaking er viktig for å unngå stikkskader. Ved uhell vises til nivå 1 prosedyre Stikkskader.Tiltak ved stikkskader og andre hendelser som kan medføre blodsmitte..

 

 

ARBEIDETS GANG

Spesielle forhold vedr. prøvetaking og forberedelse av pasient

Henviser til
ALM-MB-pre; Blodprøvetaking av voksne og barn

Prøvematerialet og bearbeidelse av dette

EDTA-plasma (evt. serum)

Prøven tas på forvarmet EDTA-glass eller fullblodsrør uten gel.
Holdes varm og settes i varmeskap (37^oC) i min 15 min (EDTA) / 30 min (serum).
Plasma/serum må skilles fra erytrocyttene uten at prøven blir avkjølt (sentrifugeres varmt).  Henviser til ALM-MB-pre; Prøvebehandling og sentrifugering

 

Holdbarhet plasma/serum:
Oppbevares i romtemperatur hvis den skal analyseres samme dag.
Holdbar 1 uke i 2-8^oC. Må da oppnå romtemperatur før analysering.

Reagenser og klargjøring av disse

Reagens	Oppbevaring	Forbehandling	Mengde
Fortynningsrekke:
Diluent pH7 (Labex)	Blodbanken, i kjøleskapdøra	Ingen	6 ml
0-blodlegemer, 5%	Blodbanken, i kjøleskapdøra	Vaskes* med Diluent pH7 før fortynning. 3000 g i 5 min	300 µL vaskede blodlegemer fortynnes til 6 ml med Diluent pH7

 

^* Vasking av 0-blod: Fyll et 6 ml sterilt rør (hvit topp) med Diluent pH7. Tilsett min 500 µL 0-blod. Sentrifuger. Hell eller pipetter av vaskevannet.

 

Feilkilder og interferens

·         Plasma/serum er ikke holdt ved 37 °C inntil det er skilt fra blodlegemene.

·         Feil utført titrering og blanding

·         Feil ved avlesning

Fremgangsmåte/Utførelse av analysen

Fortynningsrekke med plasma:

10 blanke plastglass, merkes med navne-etikett og fortynning
(1:2, neste 1:4, videre 1:8, 1:16, 1:32, 1:64, 1:128, 1:256, 1:512, 1:1024.)
Dersom det er forventet et høyt titer kan fortynningsrekka utvides med flere glass med det samme (1:2048, 1:4096…)

 

·         500 µL Diluent pH7 pipetteres i hvert av glassene.

·         500 µL plasma/serum tilsettes første glass, derfra overføres 500 µL til glass nr 2, bland godt.
Derfra 500 µL til glass nr 3 osv. Fra siste glass kastes 500 µL.

·         Til slutt tilsettes 500 µL 5 % 0-blodlegemer i alle glass.

·         Glassene korkes og blandes godt (5-8 ganger) før de settes i kjøleskap til neste dag.  

·         La hovedglasset (plasma/serum) stå i romtemperatur inntil avlesning av fortynningsrekken.

 

Vurdering av svar og svarrapportering

Umiddelbart etter at prøvene er tatt ut fra kjøleskapet avleses fortynningsrekken makroskopisk mot et lyspunkt.
Siste glass med tydelig agglutinasjon (ikke homogen løsning) regnes som siste positive titer (eks. positiv ved 1:128).

Dersom hele fortynningsrekka er positiv, settes det opp en lengre fortynningsrekke slik at siste positive titer blir målbart.

 

	Besvares i Beaker som
Avlest titer	Kuldeagglutinin påvisning	Kuldeagglutinin titer
<32	Negativ	Siste positive titer, eks 8 eller 16
> 64	Positiv	Siste positive titer, eks 128 eller 256
Når siste positive titer legges inn besvares påvisning automatisk.

 

Agglutinasjonens reversibilitet kan prøves ved å sette glassene i varmeskap ved 37 °C i ca en halv time. Agglutinasjonen skal da forsvinne helt.

 

REFERANSEOMRÅDER

Se Kuldeagglutininer (Plasma)