ALM-BB-Vakt; ABO, RhD og DAT på gelkort, navlesnorsblod og barn ≤ 3 mnd. v. 7.14

Arbeidsbeskrivelse

ARBEIDETS GANG

Prøvematerialet og bearbeidelse av dette

I de fleste tilfeller får vi ett glass EDTA-blod tatt fra barnets navlevene. Dersom man har glemt å ta av prøve fra navlevenen eller prøven er ubrukbar pga. koagler eller forurensing, tas prøven på en mikrotainer tilsatt EDTA. Det er ikke nødvendig å vaske blodlegemene før bruk.

Reagenser og klargjøring av disse

Gelkort: ID-Card DiaClon AB0/Rh for Newborns, levert av Norsk Labex, produsert av BioRad, Produkt-ID; 50961. Ref.nr. 001047 Lagring i romtemperatur

Diluent 2,-levert av Norsk Labex, produsert av BioRad. Produkt-ID: 005650. Lagres ved 5 + 3 °C, reagenset skal ha romtemperatur før det brukes.

Coombscell-E, Ref.nr. 816030, produsert av BioRad, levert av Norsk Labex.

For plassering av reagenser, se egen reagensoversikt.

Analyseutstyr og klargjøring av disse

ID-Reader, levert av Norsk Labex.
Gelkortsentrifuge, levert av Norsk Labex , produsert av BioRad, innstilt på riktig hastighet og tid.
Pipetter

Feilkilder og interferens

Bakteriell kontaminering kan gi falske positive/negative reaksjoner.

Fibrin legger seg som et lokk på toppen av brønnen. Prøven må kjøres om igjen.

For svake eller for sterke cellesuspensjoner kan gi feil resultat.

Fremgangsmåte/Utførelse av analysen

Navlesnorsblod/kapillærprøve rekvireres i ROS på fødeavdelingen. Glasset kommer ned ferdig merket med ROS-etikett. Hvis de ikke har rekvirert og bare merket glasset med barnets navn og fødselsnummer, kan vi rekvirere i ROS (ABO og RhD type og DAT, navlesnorsblod).

Tilordne kort i IHCom for ID-Reader. Se prosedyre ALM-BB-Vakt; Bruk av ID-Reader med IH-Com

Navlesnorsblod og kapillærprøver skal ikke analyseres i IH-500 pga. evt. koagler i glass og lite prøvemateriale.

· Inspiser kortet. Kort med inntørkede brønner, bobler i gelen eller skadet folie skal ikke brukes.

· Lag en 0,8-1,0% cellesuspensjon ved å ta 1,0 ml Diluent 2 + 10μl pakkede blodlegemer fra EDTA eller 20μl fullblod fra EDTA. Bruk pasteurpipette eller pipette på 1000 μl til Diluent 2.

· Pipetter 50μl av celleoppslemmingen til hver av brønnene på kortet.

· Sentrifuger kortet i gelkortsentrifugen umiddelbart.

· Les av kortet i ID-Reader Banjo. Se prosedyre ALM-BB-Vakt; Bruk av ID-Reader med IH-Com

Vurdering av svar

· Hvis brønnen som inneholder RhD gir 3+ til 4+ reaksjon utgis svaret som positivt. Hvis det er en 2+ til 1+ reaksjon utgis svaret som positivt med kommentar i IH-Com: Svak RhD-egenskap. Det er ikke nødvendig å utføre svak D-typing hvis vi har en 1+ til 2+ reaksjon

· Ved RhD negative resultat skal det types for svak D. Denne analysen bestilles automatisk i Beaker når RhD er besvart. Se prosedyre ALM-BB-Vakt; Typing av svak D. Det skal ikke utføres svak D-typing hvis DAT er positiv. Vi må derfor slette denne analysen i Beaker med fastkommentar «Dsvak kan ikke utføres pga positiv DAT».

· Brønn nr. 5 er en kontrollbrønn og skal alltid være negativ. Hvis denne brønnen er positiv, kan ikke svaret utgis. Blodlegemene må da vaskes x 3 i Diluent pH 7 og analysen settes opp på nytt. Hvis kontrollbrønnen fortsatt er positiv, anbefales det å ta en ny prøve av barnet

· IH-Com tolker ABO-typing utfra tabellen under. I tilfeller der IH-Com ikke kan konkludere (f.eks. DP), må vi ringe vakthavende lege, SOH, for hjelp til hvordan vi skal besvare prøven. Dersom dette skjer på natt og barnet ikke er transfusjonstrengende, kan vakthavende lege kontaktes neste dag. Ring rekvirent og gi muntlig resultat på RhD og DAT

· Hvis vi ikke kan konkludere på ABO-type, men kontrollbrønnen er negativ:

o Legg inn prøvekommentar i IH-Com om inkonklusiv ABO-typing

o Under rullegardin for Resultat ABO velges «Ikke testet»

o Velg Aksepter alle og Lagre

o RhD og DAT vil gå over i Beaker

o I Beaker legger vi KUN inn en kommentar på AB0-typingen om inkonklusiv AB0-typing

o Ikke utfør P538, men verifiser hele prøven direkte i Beaker

· DAT besvares som Negativ eller Positiv. Gradering legger seg automatisk på resultatet som en kommentar

· Positiv DAT utredes ikke automatisk. Det er opp til rekvirenten å sende pretransfusjonsprøve av mor hvis det vurderes som nødvendig

· For Navlesnorsblod/kapillærprøver som er RhD positivt: Ved DAT 0,5+ eller 1+ blir kommentaren «Funnet kan være forenlig med behandling av mor med anti-D profylakse i svangerskapet. Ved klinisk mistanke om hemolyse hos barnet skal det sendes en blodprøve av mor for blodtypeantistoffutredning» automatisk lagt til i Beaker når P538 utføres

· Det skal ikke utføres IgG og C3d på navlesnorsblod eller annen prøve tatt av barn ≤ 3 mnd.

Godkjenning av svar

Resultatet fra IH-Com går over i Beaker som Foreløpig verifisert. Kjør P538 og prøven blir Verifisert. Føde/Barsel henter opp svaret selv.

Analysen skal utføres som øyeblikkelig hjelp fordi anti-D gammaglobulin har best effekt når den settes så raskt som mulig etter fødsel, helst innen 2 timer, men senest innen 72 timer. Se også prosedyre ALM-IKT; Svarrapportering, Beaker.

Hensikt

Å sikre korrekt utføring av ABO-, RhD^(VI+)-typing og DAT (Direkte antiglobulin test) på navlesnorsblod eller prøve av barn ≤ 3 mnd. av RhD negative kvinner ved hjelp av gelkortteknikk.

Å sikre at RhD negative kvinner som har født RhD positive, Rh svak D positive eller RhD^VI positive barn blir profylaktisk behandlet med anti-D (Rheso gamma) for å hindre at moren blir immunisert og danner anti-D.

Anti-D gammaglobulin skal gis umiddelbart, helst innen 2 timer og senest innen 72 timer.

Omfang

Prosedyren omfatter alle bioingeniører som er godkjent for vaktarbeid på blodbanken.
Den inneholder en kort forklaring på hvorfor denne undersøkelsen skal gjøres, en beskrivelse av det gelkortet som brukes, og dessuten måten svaret behandles på.

Grunnlagsinformasjon

HISTORIKK

Analysen har vært i bruk siden 1990.

ANALYSEPRINSIPP OG TERMINOLOGI

Gelkortet har 6 brønner: Brønn nr.1 er tilsatt anti-A, nr.2 anti-B, nr.3 anti-AB, nr.4 anti-D, nr.5 er en kontrollbrønn uten tilsetting og nr.6 er tilsatt Liss/Coombs.

Når vi tilsetter en oppslemming med barnets blodlegemer til de 5 første brønnene, vil det ved sentrifugering skje en antigen-antistoff-binding. Blodlegemer som har det aktuelle antigenet på overflaten vil ikke kunne passere gjennom gelen, men legge seg som et lokk oppå gelen eller litt trukket ned gjennom det øvre sjiktet av gelen (++++ til + reaksjon). Blodlegemer som ikke har antigen på overflaten, vil passere gjennom gelen og legge seg som en knapp i bunnen av brønnen.

Gelen i brønn nr. 6 inneholder polyspesifikt AHG (anti-humant-globulin) og monoklonal anti-C3d. Hvis barnets blodlegemer er dekket med antistoffer av IgG-type og/eller komplement (C3d), vil de ikke kunne passere gjennom gelen, men bli liggende som en sky ned gjennom gelen eller som et lokk oppå gelen. Hvis blodlegemene ikke har antistoffer på overflaten, vil de passere gjennom gelen og bli liggende som en knapp i bunnen av gelen.

Kortet inneholder brønner både til blodtyping og til undersøkelse på DAT (direkte antiglobulin test). Derfor brukes Diluent 2 til denne typingen.

MEDISINSK INDIKASJON

Av alle barn som fødes av RhD negative kvinner eller kvinner som har irregulære blodtypeantistoff, skal fødeavdelingens personale ta av en blodprøve fra navlevenen. Denne prøven av barnet skal ABO- og RhD-types og undersøkes på DAT (direkte antiglobulin test).
For RhD negative kvinner er det viktig å få kjennskap til barnets RhD-type, fordi mor skal behandles med anti-D gammaglobulin hvis barnet er RhD positivt.

DAT gjøres for å finne ut om barnets erytrocytter har antistoff fra mor festet på overflaten. Det kan være en årsak til at barnets erytrocytter ødelegges og fjernes fra blodbanen, noe som kan føre til lav hemoglobin og hemolyse, som igjen gir bilirubinstigning og fare for hjerneskade.

REFERANSER

Hovedreferanse: (1) Produsent BioRads produkt og arbeidsbeskrivelse. DiaClon AB0/Rh for Newborns. Produkt-ID; 50961.Ref.nr.001047.

Offisielle godkjenninger: (1) Produsenten BioRad oppgir å være sertifisert etter ISO 9001:2000 og EN ISO 13435:2000 og oppgir å praktisere GMP. (1) har IVD-merke på reagensene, alle reagensene er CE-merket.

Høring: Prosedyren har vært til høring hos alle som er godkjent for bakvakt på blodbanken, og hos en del av de andre bioingeniørene som er godkjent for å utføre analysen.

Nyttig litteratur: Immunologi og transfusjonslære (Statens Helsetilsyn 1995)
Veileder for transfusjonstjenesten i Norge, utgitt av Helsedirektoratet utgave 7.3 2017. https://helsedirektoratet.no/retningslinjer/veileder-for-transfusjonstjenesten-i-norge

INTERN KVALITETSKONTROLL

Kortene kontrolleres ved mottak.

Vi bruker 3 kort til kontroll. Sett opp A-/A+, B-/B+ og 1 svak D, slik at alle brønner får negativ og positiv kontroll. Ktr.brønn skal alltid være negativ.
For å ha en kontroll på at coombsreagenset i brønn 6 er virksomt, tilsetter vi 50 ul Coombscell-E til brønn 6 i et av kortene.

Resultat føres i fil for mottakskontroll. Kortene leses på Banjo, se prosedyre ALM-BB-Vakt; Bruk av ID-Reader med IH-Com.

Hvis kontrollene ikke gir det resultat vi forventer, må vi finne årsaken til dette. Vi lager nye kontroller og setter opp på nytt. Evt. avvik noteres i fil for mottakskontroll og rapporteres til fagbioingeniør eller seksjonsleder. Hvis det viser seg at det er noe feil med gelkortene, må de kasseres og leverandøren kontaktes slik at vi får nye kort.

Hvis vi mangler kort, kan vi få fra den andre blodbanken i foretaket, evt. må prøven sendes til SOH for analysering.

ANSVAR

Seksjonsleder på blodbanken i samarbeid med fagbioingeniør som er ansvarlig for laboratorieanalysene er ansvarlig for at teknikken og de reagensene som brukes er validert og godkjent av norske helsemyndigheter. Fagbioingeniør er ansvarlig for at prosedyren til enhver tid er oppdatert.

HMS/sikkerhetsinformasjon

Alle reagenser og blodprøven behandles som potensiell infeksiøs.

Forfatter:	Lene Johnsen Salberg (Overbioingeniør)
Godkjent av:	Birgit Johanne Hoel Stubbe (Seksjonsleder)
Dokumentadministrator:	Tove Elisabeth Berg Vordal (Fagansvarlig bioingeniør)
Dokument-ID:	4543
Gyldig fra:	09.02.2024
Revisjonsfrist:	07.02.2029