Hensikt

Sikre at analysering av Trombocytter (TPK) i blod, på Sysmex XN, gir et korrekt og optimalt svar til rekvirenten.

Omfang

Gjelder alle ansatte ved Avdeling for Laboratoriemedisin som er godkjent for å analysere prøver på Sysmex.

Grunnlagsinformasjon

HISTORIKK

Trombocytter har blitt analysert på ulike instrumenter siden før 1970. Sysmex XN-1000 ble tatt i bruk i 2015. Sysmex fungerte som back-up-instrument for Cell-Dyn Sapphire, pluss at de fleste tilsendte prøver ble analysert her. 2019 ble CellDyn byttet ut med Sysmex XN-1500.

Sysmex XN-1500 fungerer som hovedinstrument for ferske prøver og som back-up for Sysmex XN-1000.

 

ANALYSEPRINSIPP OG TERMINOLOGI

Terminologi:
Trombocytter er kjerneløse cellefragmenter som dannes av megakaryocytter i beinmargen. Diameteren er omkring 2 mikrometer og volumet ca. 7 fL. Diameteren avtar etter som trombocytten modnes og blir eldre. Normal overlevelse i sirkulasjon er ca. 9-10 dager. Trombocyttenes viktigste funksjon er å stoppe blødninger. Ved karskade bindes ulike molekyler på trombocytten seg til molekyler i karveggen. Karskaden aktiverer også trombocyttens fibrinogenreseptorer, slik at trombocyttene kan binde seg til hverandre og danne en plateplugg (primær hemostase). Under dannelse av platepluggen frigjøres en del substanser som påskynder den primære hemostasen. Disse substansene har også betydning for igangsetting av koagulasjonen som sikrer platepluggen med et nettverk av fibrin (sekundær hemostase).
Ved trombocyttmangel sees typiske punktformige blødninger i huden (petekkier). Mer utbredte, flateformige blødninger (ekkymoser) kan også forekomme.

Prinsipp:

Trombocytter kan analyseres med tre forskjellige metoder; impedansemåling, optisk måling med fluorescens (PLT-F) og optisk måling. Den siste rapporteres ikke, men måles i forbindelse med analysering av retikulocytter.

Impedansemåling

Elektrisk impedans er et mål for evnen et objekt har til å hindre bevegelse av elektrisk ladning.

To elektroder er plassert på hver sin side av en kapillæråpning (aperture) med kjente dimensjoner.

Spenningen som må til for å sende en konstant strøm gjennom kapillæråpningen måles. En suspensjon av celler i saltvann (god ledningsevne) dras gjennom kapillæret. På grunn av cellemembranens isolerende egenskaper vil blodlegemer lede elektrisk strøm dårlig, mens saltvann leder elektrisk strøm godt. I det en celle passerer kapillæråpningen, øker derfor motstanden i strømkretsen, og spenningen må økes for å holde strømmen konstant.
Spenningsøkingen registreres som en puls, og indikerer at en celle har passert gjennom kapillæret.

Hydrodynamisk fokusering brukes for å sikre at cellene passerer enkeltvis og sentralt gjennom kapillæråpningen. Antall pulser er proporsjonalt med antall celler.
Ettersom høyden (amplituden) til pulsen som dannes når en celle passerer sentralt gjennom kapillæråpningen er proporsjonal med volumet, kan volumet til cellen kalkuleres ved å multiplisere med en gitt faktor.

Optisk måling med fluorescens (PLT-F)

PLT-F-kanalen brukes for nøyaktig måling av trombocytter, spesielt for lave trombocyttantall.

Prøven fortynnes med Cellpack DFL og tilsettes så Fluorcell PLT, som inne holder oxacin.

Oxacin bindes til RNA i trombocyttene og DNA i leukocyttene.

Et todimensjonalt spredningsskjema plottes ved hjelp av flowcytometrimetoden ved bruk av halvlederlaser. X-aksen representerer intensiteten på det laterale fluorescerende lyset (SFL) og Y-aksen representerer intensiteten på lyset som spres forover.

Dette spredningsskjemaet viser grupper med trombocytter, deler av røde blodceller, deler av hvite blodceller og urenheter.

IPF (Fraksjon av umodne trombocytter) beregnes som et forhold mellom trombocyttantallet i området med sterk intensitet på det fluorescerende lyset i PLT-F-spredningsskjemaet (IPF-sone) og det totale trombocyttantallet. IPF (Fraksjon av umodne trombocytter): IPF (%)= (Partikkeltall i IPF-sone / Partikkeltall i trombocyttsone) x100

 

 

MEDISINSK INDIKASJON

Se TPK (Trombocytt partikkel konsentrasjon) (Blod)

 

REFERANSER

Hovedreferanse:	Sysmex brukermanual –22 (1)
Tilleggsreferanser:	Nasjonal brukerhåndbok medisinsk biokjemi –21 (2)
	Holdbarhet for hematologiske analyser ved Seksjon hematologi. AMB (SOH EQS 26842 v.3.5) (3)
Offisielle godkjenninger:	ISO-sertifisering 9001, Utstyr CE merket etter IVD direktivet (4)
Interne verifiseringer:	ALM-MB-Hem; Validering av SYSMEX XN-1000 (Ikke tilgjengelig) og ALM-MB-Hem; Validering av Sysmex XN-1500

METODENS YTELSE

Måleusikkerhet:

Det blir beregnet gjennomsnittlig CV for instrumentene målt i kontrollblod i tre nivå. Hver annen måned (pga lotskifte) beregnes mean, CV og SD. Lagres i Teams.

Måleområde/linearitet:

1 - 5000 x 10⁹/L (PLT-F)

10 - 5000 x 10⁹/L (Impedanse)

Presisjon (reproduserbarheten) og nøyaktighet:

ALM-MB-Hem; Validering av SYSMEX XN-1000 (Ikke tilgjengelig) og
ALM-MB-Hem; Validering av Sysmex XN-1500

 

STANDARDER/KALIBRATORER

Begge instrumentene kalibreres med XN CAL fra Sysmex. Dette gjøres hovedsakelig av Sysmex sine serviceingeniører når service blir utført. Kan unntaksvis utføres av fagbioingeniør ved behov.

 

INTERN KVALITETSKONTROLL

Det benyttes tre kommersielle kontroller og pasientprøver som interne kvalitetskontroller.

Kommersielle kontroller fra Sysmex, brukes hver dag i 3 nivå.

-          XN Check Level 1

-          XN Check Level 2

-          XN Check Level 3

To nivå pr instrument.
X-M - pasientmean over tid.

Tre pasientprøver samkjøres mellom instrumentene

Se egen prosedyre ALM-MB; Sysmex XN

 

EKSTERN KVALITETSKONTROLL

Vi benytter kontroller fra NOKLUS, som ekstern kontroll, og følger deres program for kontrollnivå og hyppighet.
Resultatene ligger i kvalitetssystemet EQS

Henviser til prosedyre: ALM-; Sammenlignende laboratorieprøvinger (SLP, ekstern kvalitetskontroll, ringtest) - håndtering og vurdering

 

ANALYTISK KVALITET

Tillatt totalfeil (TEA): 20%
Fastlagt etter en vurdering av analysens yteevne i forhold til de medisinsk behov

 

Arbeidsbeskrivelse

Kort oversikt over Trombocytter

• Prøvemateriale: EDTA-blod, Citratblod, Heparinblod
• Prøvevolum: 88 µL
• Standardpipettering. Ufortynnet
• Metoder på instrumentet: Impedanse, optisk-metode og optisk med fluorescense
• Betegnelse på instrumentet: PLT
• Betegnelse i datasystemet: b-Trombocytter
• Kalibratorer fra Sysmex NO
• Kontroller: XN Check lav, normal og høy, pasientprøver
• Reagenser: Cellpack DCL, Fluorocell PLT
• Benevning: 10⁹/L
• Måleområde: 1- 5000 x 10⁹/L

 

ANSVAR

Fagbioingeniør og / eller spesialbioingeniør er ansvarlig for at instrumentet fungerer og at prosedyren er oppdatert.
Alle som har Sysmex som arbeidsoppgave er ansvarlig for å gjøre seg kjent med og følge prosedyren etter opplæring. Den enkelte skal også forsikre seg om at instrumentet er i orden iht. prosedyrene før start av analysering.

HMS/sikkerhetsinformasjon

Alle blodprøver skal behandles som en potensiell smittefare.
Reagenser: Henviser til  Ecoonline.no

ARBEIDETS GANG

Spesielle forhold vedr. prøvetaking, prøvemateriale og forberedelse av pasient
Henviser til:
ALM-MB-pre; Blodprøvetaking av voksne og barn

Bruker fortrinnsvis EDTA- blod. Ved mistanke om kuldeantistoff forvarmes prøven til 37 grader. Citrat brukes ved problemer med trombocyttaggregering. Husk fortynningsfaktor ved citratblod. Se Beregning av svar

 

Holdbarhet:

Se TPK (Trombocytt partikkel konsentrasjon) (Blod)
Impedanse: 96 timer ³
PLT-F: 48 timer ¹

Analyseutstyr og klargjøring av disse

Instrumentet klargjøres etter prosedyre ALM-MB; Sysmex XN

 

Reagenser og klargjøring av disse

Produktdatablad for reagensene finnes på  Ecoonline.no

Leverandør: Sysmex Norge

Alle reagensene kommer klar til bruk, og oppbevares i romtemperatur

 

•         Cellpack DCL:

Holdbarhet:

Uåpnet: Til utløpsdato

På instrumentet: 60 dager

Volum: 10 L

 

•         Fluorocell PLT:

Holdbarhet:

Uåpnet: Til utløpsdato

På instrumentet: 90 dager

Volum: 2 x 12 mL

 

•         Fluorocell RET:

Holdbarhet:

Uåpnet: Til utløpsdato

På instrumentet: 90 dager

Volum: 2 x 12 mL

•         Cellpack DFL:

Holdbarhet:

Uåpnet: Til utløpsdato

På instrumentet: 60 dager

Volum: 2 x 1,5 L

Feilkilder og interferens

•         Falsk for lavt trombocyttantall.

o   Trombocyttaggregering

o   Store trombocytter

•         Falsk for høyt trombocyttantall

o   Mikro RBC

o   Fragmenterte RBC

o   Fragmenterte leukocytter

o   Kryoglobulin

 

In vitro trombocyttaggregering er som regel forårsaket av antistoffer som er aktive i nærvær av EDTA.

Alle trombocyttresultat som er <100 kontrolleres første gang i mikroskop for å se etter aggregering. Se i mikroskop; bruk trepinne til å ta på en dråpe fullblod på et objektglass, bruk fasekontrast.
Påvist aggregering: Se ALM-MB; Sysmex XN Resultathåndtering i EPU.
Ved koagel må ny prøve tas (avtal med avdeling).

 

Ved kapillærprøve er det viktig at det ikke klemmes mye og at første glass og første dråpe blir benyttet til trombocytter.

 

Fremgangsmåte/Utførelse av analysen

Se prosedyre: ALM-MB; Sysmex XN

 

Beregning av svar

Svarene fra analyseinstrumentet gis direkte ut.

∙ Ved bruk av PT-INR-glass multipliseres Hb-resultatet med 1,11.

∙ Ved bruk av SR-glass multipliseres Hb-resultatet med 1,25.

Se prosedyre: ALM-MB; Sysmex XN

Trombocytter benyttes også i beregningen av FIB-4:

 

REFERANSEOMRÅDER

Voksne:
Hentet fra SOH: «Ref. området for voksne er funnet ved innkjøring av eget materiale (prøver fra 267 blodgivere) på Sysmex XN rev. 2018

Barn:
Aldrimer, M., et al., Population-based pediatric reference intervals for hematology, iron and transferrin. Scand J Clin Lab Invest, 2013. 73(3): p. 253-61

Se
Trombocytter (Blod)

Oppfølgende tiltak i forbindelse med svar

Se
ALM-MB; Sysmex XN Resultathåndtering i EPU og
ALM-; Ringerutiner for Medisinsk biokjemi og Blodbank

 

Vurdering og godkjenning av svar

Svarene verifiseres i EPU og overføres direkte til Beaker.
Svar som ifølge verifiseringsreglene ikke blir autoverifisert, vurderes manuelt (se ALM-MB; Sysmex XN Resultathåndtering i EPU) og godkjennes i Beaker.

 

Autoverifiseringen er satt til å gjelde svar > 100 og < 700. Svar utenfor disse grensene og/eller alarm på en eller flere analyser i prøven, blir holdt tilbake for manuell vurdering.

 

Svarrapportering

Se
ALM-MB-IKT; Manuell overføring av prøvesvar fra analysemaskin til online-PC og
ALM-IKT; Svarrapportering, Beaker

Videre svarrapportering er etter Avdeling for laboratoriemedisin sine rutiner.