ALM-MB-Hem; Sysmex XN, Reticulocytter (Retic) i fullblod v. 1.5

Arbeidsbeskrivelse

Kort oversikt over Retikulocytter

• Prøvemateriale: EDTA-blod, CITRAT-blod.

• Prøvevolum: 88 µL i både auto og manuell mode.

• Standardpipettering: Ufortynnet.

• Metoder på instrumentet: Fluorescens flowcytometri og optisk måling

• Betegnelse på instrumentet: Ret

• Betegnelse i datasystemet: b-Retic

• Kalibratorer: Retic kalibreres Sysmex XN CAL

• Kontroller: XN Chek L, N og H og pasientprøver

• Reagenser: Cellpack DFL, Fluorcell Ret.

• Benevning: 10¹²/L

• Måleområde: 0,01-0,72 · 10¹²/L

ANSVAR

Fagbioingeniør og / eller spesialbioingeniør har ansvar for prosedyren og oppdatering av denne. Alle som har fått opplæring og er godkjent for analysering på Sysmex er ansvarlig for at prosedyren blir fulgt. Se Omfang

HMS/sikkerhetsinformasjon

Alle blodprøver, kontroller og kalibratorer skal behandles som potensielt smittefarlig. Se prosedyre for Usterile engangshansker. Valg og bruk av usterile hansker.

HMS-datablad for reagensene forefinnes i Ecoonline:

• Fluorcell Ret er kreftfremkallende!

ARBEIDETS GANG

Spesielle forhold vedr. prøvetaking og forberedelse av pasient

Henviser til ALM-MB-Hem; Sysmex XN, Erytrocytter (Epk) i fullblod

Prøvematerialet og bearbeidelse av dette

Henviser til ALM-MB-Hem; Sysmex XN, Erytrocytter (Epk) i fullblod

• Holdbarhet:⁴⁾ Ved temperatur 2 til 25 °C:

o Retic: 72 timer.

Reagenser og klargjøring av disse

Leverandør: Sysmex Norge

Alle reagenser kommer klare til bruk, og oppbevares i romtemperatur.

• Cellpack DFL

Holdbarhet:

Uåpnet: Til utløpsdato, men kan brukes etter den tid ved godkjente kontroller.

I instrumentet: 60 dager.

Volum: 1,5 L.

Innhold: Tricine-buffer 0,17 %

• Fluorcell Ret (Kreftfremkallende)

Holdbarhet:

Uåpnet: Til utløpsdato, men kan brukes etter den tid ved godkjente kontroller.

I instrumentet: 90 dager.

Volum: 12 mL.

Innhold: Polymetinfargestoffer 0,03 %, Metanol 7,9 %, Etylenglykol 92,0 %

Avhending: Hullet på pakningen lukkes med tape før den kastes!

Analyseutstyr og klargjøring av disse

Sysmex klargjøres etter prosedyre ALM-MB; Sysmex XN.

Feilkilder og interferens

• Falskt for høy:

o Kuldeagglutininer (pga at RBC blir falskt for lav)

o Malaria-plasmoider

o Howell Jolley bodies

o Store, RNA-rike trombocytter

o Fragmenterte leukocytter

• Falskt for lav:

o Hemolyse

Fremgangsmåte/Utførelse av analysen

Se prosedyre ALM-MB; Sysmex XN.

Beregning av svar

Svarene fra analyseinstrumentet gis direkte ut, men må korrigeres ved bruk av annet prøvemateriale enn EDTA.

• Ved bruk av CITRAT-glass multipliseres RBC-resultatet med 1.11.

• Ved bruk av SR-glass multipliseres RBC-resultatet med 1.25.

REFERANSEOMRÅDER

Ref. området for voksne er funnet ved innkjøring av eget materiale (prøver fra 267 blodgivere) på Sysmex XN i 2015 ved SOH.
Barn: K.R. Herkner; A. Bøck, A. Muhl, S. Neubauer og C.Herkner; Pediatriske referanseverdier for retik; Sysmex Journal International Vol.2 No.1 (1992)

Se Reticulocytter (Blod)

Oppfølgende tiltak i forbindelse med svar

ALM-MB; Sysmex XN Resultathåndtering i EPU

Vurdering og godkjenning av svar

Svarene autovalideres i EPU og overføres direkte til Beaker.

Svar som i følge valideringsreglene ikke blir autovalidert, vurderes manuelt (se under oppfølgende tiltak i forbindelse med svar) og godkjennes i Beaker.

Autovalideringen er satt til å gjelde svar > 0,01 og < 0,35 ^. 10¹²/L. Svar utenfor disse grensene og/eller alarm på en eller flere analyser i prøven, blir holdt tilbake for manuell vurdering.

Retic < 0,01 ^. 10¹²/L (under måleområdet) gis ut som < 0,01 ^. 10¹²/L.

Svarrapportering

Se
ALM-MB-IKT; Manuell overføring av prøvesvar fra analysemaskin til online-PC og
ALM-IKT; Svarrapportering, Beaker,
videre svarrapportering er etter Avdeling for laboratoriemedisin sine rutiner.

Hensikt

Sikre at utførelsen av analysen Retikulocytter (Retic) i blod på Sysmex XN gir et korrekt og optimalt svar til rekvirenten.

Omfang

Prosedyren gjelder alle som har fått opplæring i analysering av Retic, og som har Sysmex som arbeidsoppgave.

Se ALM-; Opplæring, oppdatering og vedlikehold/heving av kompetanse .

Grunnlagsinformasjon

HISTORIKK

Levanger:

Retikulocytter ble analysert på CellDyn Sapphire (fra 30/5-2012) og Sysmex XN-1000 (fra høsten 2015). Tidligere har det blitt analysert på Sysmex XT 2000i, CellDyn 4000 og Coulter Max-M. Før den tid ble retikulocytter telt manuelt i Millers okular.

Namsos:

Retikulocytter har vært analysert maskinelt siden høsten 2001.

Før den tid ble retikulocytter kvantitert manuelt i mikroskop ved bruk av Millers okular.

Fra høsten 2001 til høsten 2003 ble CellDyn 4000 benyttet til å kvantitere retikulocytter.

Fra høsten 2003 til mai 2011 ble Sysmex XT 2000i benyttet til dette.

Siden 30. mai 2011 er retikulocytter kvantitert ved hjelp av CellDyn Sapphire.

Siden høsten 2015 blir retikulocytter også kvantitert på Sysmex XN-1000.

Fra 15/5-19 blir reticulocytter analysert på Sysmex XN-1000 og XN-1500 på begge sykehus.

ANALYSEPRINSIPP OG TERMINOLOGI

Terminologi ³⁾

Retikulocytter er unge erytrocytter som inneholder en del mitokondrier, noen ribosomer og et Golgi-apparat. Når slike celler supravitalfarges, får vi aggregasjon av ribosomer og mitokondrier. Aggregatene tar opp farge og i mikroskop ser dette ut som et småklumpet nettverk (retikulum). Retikulocytter tilbringer normalt to døgn i beinmargen før de slippes ut i sirkulasjonen. Etter ytterligere to døgn i sirkulasjon er det så lite organeller tilbake i cellene at de ikke lenger kan regnes som retikulocytter. Erytropoietin øker erytropoesen og stimulerer frigjøringen av retikulocytter fra beinmargen. Økt erytropoietinsekresjon ved akutt anemi forkorter retikulocyttenes modningstid i beinmargen og øker retikulocyttmengden i blod før produksjonen av erytrocytter reelt er økt. Analyse av retikulocytter ble tidligere utført med en manuell og relativt upresis metode. På de aller fleste laboratorier utføres nå denne celletellingen maskinelt. En slik retikulocyttbestemmelse gir langt mer presise resultater, særlig i lave områder. I tillegg gir maskinell metode mulighet for bestemmelse av retikulocyttfraksjoner, dvs. en gruppering av cellene med hensyn til modningsgrad. Flere hematologi-instrumenter utgir Immature Reticulocyte Fraction (IRF) som representerer den relative andel av de yngste retikulocyttene (de yngste blant de unge) og er et mål på de cellene som nylig er produsert i beinmargen. Dette gir mulighet for å oppdage selv små forandringer i den effektive erytropoiesen på et tidlig stadium.

Analyseprinsipp ²⁾

Til telling av retikulocytter benyttes RNA/DNA farging med polymethin. Innholdet av RNA- fragmenter detekteres ved hjelp av fluorescens signal i flowcellen. Desto mer umodne retic i pasientprøven, jo lengre mot høyre i scattergrammet vil cellene være. Retikulocyttene deles opp i 3 ulike modenhetsfraksjoner ut fra modningsgrad; LFR, MFR og HFR (lav fluorescens-, middel fluorescens- og høy fluorescens retikulocytter).

Instrumentet benytter videre fraksjonene MFR og HFR til å beregne IRF (Immature Reticulocyte Fraction) eller umodenhetsfraksjon.

Prinsippene som benyttes er cellenes størrelse (Foreward Scatter) og innholdet RNA (Side fluorescens).

Dette er en helautomatisk metode. Det er ikke behov for manuell forfortynning.

Det er få interferenser på denne metoden. Malariaplasmodier kan gi falsk for høye retikulocyttverdier. De inneholder RNA og vil dermed kunne generere fluorescens signal. Ellers ingen interferenser av betydning uten at instrumentet varsler.

Instrumentet gir ut retikulocytter i absolutt tall # og i %, samt i modenhetsfraksjoner (IRF).

IRF er de 2 mest umodne fraksjonene av retic: HFR og MFR.

IRF er en av de tidligste parameterne som øker ved økt erytropoietin-aktivitet, hvis benmargen fungerer slik den skal.

Medisinsk indikasjon ³⁾

Reticulocytter (Blod)

REFERANSER

Hovedreferanse:

(1) Sysmex brukermanual. Versjon 22 og sensere. Sist revidert aug 2017

Tilleggsreferanser:

(2) Generell produktinformasjon Sysmex. Mottatt 2018.

(3) Nasjonal brukerhåndbok i Medisinsk Biokjemi (J. Stakkestad, A. Åsberg m.fl.)

(4) Holdbarhetstabell for analyser ved Seksjon for hematologi AMB, SOH. EQSDocument 26842 v. 3.0

Offisielle godkjenninger:

(5) Leverandør oppgir å være ISO 9001 sertifisert. Utstyr og reagenser er CE-merket etter IVD direktivet.

Interne valideringer:

(6) Analysen har blitt kontrollert siden oppstart med daglige kvalitetskontroller og eksterne kvalitetskontroller og resultatene har vært tilfredsstillende. Se metodens ytelse.

(7) Valideringsrapport: ALM-MB-Hem; Validering av SYSMEX XN-1000 (Ikke tilgjengelig) og ALM-MB-Hem; Validering av Sysmex XN-1500

Høring:

Prosedyren har vært til høring hos overlege, fagbioingeniør og spesialbioingeniør.

METODENS YTELSE

Måleusikkerhet:

Det er beregnet gjennomsnittlig CV for instrumentet målt i kontrollblod i to nivå. Hver måned blir det vurdert mean, SD, CV og antall kontroller som er kjørt. Dataene lagres.

Måleområde/Linearitet:

Retic: 0,01-0,72 ^. 10¹²/L

Presisjon/Nøyaktighet:

Se valideringsrapport

Standarder/Kalibratorer

Sysmex XN kalibreres med Sysmex XN CAL, levert av Sysmex. Kalibreringen etter service og ellers ved behov.

Verdiene på kalibratoren er hentet fra replikate kjøringer på referanseinstrument som er kalibrert i henhold til NCCLS og ICSH-anbefalt metode, referansemetode.

Se ALM-MB; Sysmex XN.

INTERN KVALITETSKONTROLL

Det benyttes to kommersielle kontroller og pasientprøver som interne kvalitetskontroller:

• Kommersielle kontroller, brukes hver dag i 2 nivå.

• Pasientprøver

o Samkjøring mellom instumentene

o X-M – pasientmean over tid