ALM-MB-Koag; Sysmex CS-2500, PTINR i plasma v. 3.7

Hensikt

Sikre at analysen har optimal kvalitet og at instrumentene brukes korrekt.

 

Omfang

Prosedyren gjelder alle som har fått opplæring i bruk av, og utgivelse av svar fra Sysmex CS-2500.

 

Grunnlagsinformasjon

 

HISTORIKK

Laboratoriene har analysert NT og TT siden før 1970. Fra 1980 til 1997 ble KC-10 anvendt til TT, NT, Cephotest og Fibrinogen, mens hurtigtester ble anvendt til D-DIMER.

Siden 1.11.1999 er enheten INR blitt brukt for protrombintid. Trombotest TT % ble brukt før den tid.

PT-INR er etter den tid analysert på Thrombolyzer, Sta-Compact og STA-R Evolution.

 

Etter et felles regionalt anbud i HMN tok Levanger i bruk 2 stk Sysmex CS-2500 okt-21 og Namsos juni-24.

ANALYSEPRINSIPP OG TERMINOLOGI

 

MRX PT Owren reagens brukes til bestemmelse av protrombinkompleksaktivitet,

protrombintid (PT). MRX PT Owren -metoden er avhengig av aktiviteten til de vitamin K-avhengige koagulasjonsfaktorene FII, FVII og FX. Hos pasienter behandlet med vitamin K-antagonister vil aktiviteten til de K-vitaminavhengige koagulasjonsfaktorene bli hemmet og resultere i forlenget PT. En PT-metode er basert på aktivering av den ytre aktiveringsveien for hemostase for FVII av tromboplastin i nærvær av CaCl2. Det aktiverte komplekset (FVIIa-vevsfaktor) aktiverer FX. FXa, i kompleks med FV, aktiverer protrombin (FII) til trombin, noe som fører til at fibrinogen omdannes til fibrin, som påvises som et koagel

 

Ved analyse av PT blandes prøve og reagens, tilsetningen av kalsiumioner utløser koaguleringsprosessen og koaguleringstiden kan da måles. Avleses med fotometrisk måling av clotdannelsen. Den endelige prøvefortynningen er 1:21. Reagens tilsettes FV og fibrinogen fra bovint plasma (uten FII, FVII og FX), slik at det ikke er følsomt for variasjoner i pasientens FV- og fibrinogennivåer. På grunn av 1:21 prøvefortynning er metoden også relativt ufølsom for heparin.

 

INR (Internationoal Normalized Ratio)

INR er en av WHO`s anbefalte måter å angi PT (protrombintid).

For bedre å kunne sammenligne verdier fra ulike protrombintester, er enheten INR innført. I Norge er denne enheten brukt fra og med 1.11.1999.

INR er en ratio mellom pasientens protrombintid og protrombintid i normalplasma.

Ratioen opphøyes i en eksponent, kalt ISI.

 

ISI (International Sensitivity Index).

ISI gir uttrykk for tromboplastin-reagensets styrke. ISI- verdien vil variere ved ulike tromboplastiner, analysemetoder, instrumenter og prøvematerialer.  WHO har et tromboplastinplasma som har en ISI-verdi som er definert til 1,0, og produsentene kalibrerer sine reagenser i forhold til dette.

 

I Norge brukes det ulike metoder og det viser seg at pasientsvarene kan bli noe ulike. Se utprøvelser som NOKLUS/SKUP har gjort.

 

MEDISINSK INDIKASJON

Se PT-INR (Protrombintid) (Plasma)

 

TOLKNING

Se PT-INR (Protrombintid) (Plasma)

 

REFERANSER

Hovedreferanse:

1.      Sysmex CS-2500 Norsk Brukermanual, nov-15

2.      Sysmex CS-2500 Referanseveiledning 2.00, mars-16

 

Tilleggsreferanser:

3.      Produktbeskrivelser fra Siemens og MediRox

4.      Besvarelse av analysekrav til PT-INR (Siemens – svar på krav i anbudet)

5.      Klinisk transfusjonshåndbok, Norsk forening for immunologi og transfusjonsmedisin, Den norske legeforening, 2017

6.      NOKLUS Holdbarhetsdatabase PT-INR 14.09.21

7.      CLSI-dokument H21-A5 Collection, Handling, Transport, and Storage for Hemostasis, Februar 2008

8.      Bacheloroppgave NTNU 2020, K Matberg, SK Martinsen; Holdbarhetsstudie - kjølig oppbevaring av prøver til analyse av PT-INR

 

Interne verifiseringer:

9.      ALM-L-MB; Validering av Sysmex CS-2500 med analysene PT-INR, APTT og Fibrinogen (Ikke tilgjengelig)

10.  ALM-MB-N; Verifisering av Sysmex CS-2500 med analysene PT-INR, APTT, Fibrinogen og D-Dimer (Ikke tilgjengelig)

 

Offisielle godkjenninger:

11.  Utstyr og reagens er CE merket etter IVD direktivet.

 

METODENS YTELSE

Måleusikkerhet:
Det er beregnet gjennomsnittlig CV for instrumentene målt i kontrollblod i to nivå.
Hver måned beregnes mean, SD, CV og antall kontroller som er kjørt. Dataene lagres i Teams.

Se for øvrig
PT-INR (Protrombintid) (Plasma) og ref. 9 og 10. 

 

Måleområde/Linearitet:

Instrumentet måler primært fra 15 – 180 sek, ved behov 15 – 600 sek.

INR gis ut i området 0,7 - 8,0.

 

STANDARDER/KALIBRATORER

PT-INR kalibreres med Equalis kalibrator ved nytt lotnummer av MRX PT Owren, og ved behov.

 

INTERN KVALITETSKONTROLL

Det benyttes to interne kvalitetskontroller: CtrlN fra Siemens og OKP fra MediRox

For utførelse av intern kvalitetskontroll, se ALM-MB-Koag; Sysmex CS-2500.

 

EKSTERN KVALITETSKONTROLL

Vi deltar i Labquality Noklus-SLP 4 gang pr år.

Henviser til ALM-; Sammenlignende laboratorieprøvinger (SLP, ekstern kvalitetskontroll, ringtest) - håndtering og vurdering.

 

Våre resultater finnes i kvalitetssystemet EQS.

 

ANALYTISK KVALITET

Tillatt totalfeil (TEA): 15 % (CLIA)

 

Arbeidsbeskrivelse

Kort oversikt over PT-INR

  • Prøvemateriale: Citrat – plasma, fortynning 1+ 9.
  • Prøvevolum: 7 µL
  • Metode på instrumentet: Fotometrisk avlesing av clotdannelse
  • Betegnelse på instrumentet: PT INR
  • Betegnelse i datasystemet: P-PT-INR
  • Kalibratorer: Equalis kalibrator.
  • Kontroller: Cntl N og OKP
  • Reagenser: MRX PT Owren, CaCl2 og MRX PT Buffer (Owrens buffer)
  • Benevning: INR
  • Benyttet måleområde: 0,7-8,0 INR

 

ANSVAR

Fagbioingeniør og/eller spesialbioingeniør er ansvarlig for at instrumentet til enhver tid fungerer og at prosedyren er oppdatert. Den enkelte er ansvarlig for å gjøre seg kjent med prosedyren og gjennomføring av analysene etter opplæring.

 

HMS/sikkerhetsinformasjon

Henviser til Ecoonline.no for informasjon om reagenser.

Alle blodprøver behandles som potensielt smittefarlig. Ved vedlikehold av instrument bør en beskytte seg mot potensielt smittefarlige blodrester. Se prosedyre Usterile engangshansker. Valg og bruk av usterile hansker.

 

ARBEIDETS GANG

Spesielle forhold vedr. prøvetaking og forberedelse av pasient

Se ALM-MB-pre; Blodprøvetaking av voksne og barn

Venøs/arteriell prøve

Unngå langvarig stase, tilstreb problemfri prøvetaking. Citrat-glasset bør fylles til strek merket på glass. Ved mindre blodmengde bør ny prøve tas.

 

Kapillær prøve

Ved vanskelig prøvetaking/nyfødte kan prøven tas kapillært, anmerk da med analysekommentar at kapillær prøve er tatt.

Levanger: CoaguChek. Se ALM-MB-L; PT-INR på CoaguChek.
OBS! Dette er Quicks metode, den er også følsom for faktor V. Tilstedeværelse av Lupus antistoff kan føre til forhøyet INR.
For nyfødte (og andre) må en være obs på at EVF ikke må være > 0,55.
Merk også at denne bestilles som egen analyse (B-PT-INR, PNA)

Prøvematerialet og bearbeidelse av dette

Blod tatt på Citrat-glass, godt blandet, sentrifugeres ifølge ALM-MB-L-pre; Sentrifugehastighet, felles. Plasmaet kan være litt hemolysert. Ved kraftig hemolyse, må ny prøve tas.

 

Holdbarhet:

 

 

 

 

Romtemperatur
(20-25 oC)

Kjøleskap
(2-8 oC)

Fryser
(-20 oC og kaldere)

Citratblod – usentrifugert

48 timer 4,6,7

48 timer* 8

Ikke holdbar

Citratplasma – avpipettert

48 timer 4,6,7

48 timer* 8

2 uker 7

(Se pakningsvedlegg)

* Dersom kjølig forsendelse eller oppbevaring må prøven få romtemperatur før analysering.

 

Reagenser og klargjøring av disse

Reagens og kontroller som brukes til analysering av PT-INR:

  • MediRox PT Owren
  • MediRox PT Buffer (Owrens buffer)
  • CaCl2
  • CtrlN
  • OKP

 

Se ALM-MB-Koag; Reagenser og kontroller til Sysmex CS-2500 for oppbevaring, tillaging og bruk.

 

Analyseutstyr og klargjøring av disse

Se ALM-MB-Koag; Sysmex CS-2500

 

Feilkilder og interferens

  • Vanskelig prøvetaking som gir mikrokoagler i glasset
  • For lite blod i CITRAT-glasset
  • Ufraksjonert heparin opptil 1 IU/mL vil ikke påvirke resultat.
  • Hemolyse.

 

Ofte stilte spørsmål (FAQ)

  • Når kan man kontrollere PT-INR etter avsluttet plasmatransfusjon?
    • Kan kontrolleres etter 15-30 min 5

Fremgangsmåte/Utførelse/Kalibrering av analysen

Se ALM-MB-Koag; Sysmex CS-2500.

 

Beregning av svar

Ut fra koagulasjonstiden beregnes PT-INR automatisk av instrumentet.

 

 

Referanseområder

Normalområde:
Referanseområde baserer seg på resultater fra blodgivere ved St.Olavs Hospital, 2021.

Se PT-INR (Protrombintid) (Plasma)

 

Vurdering og godkjenning av svar

•         PT-INR > 4,0 reanalyseres automatisk i instrumentet. Svaret sjekkes mot tidligere resultat for pasienten. Dersom resultatet er unaturlig for pasienten, analyseres også en høy kontroll (OKP)

•         PT-INR < 0,7 og > 8,0 gis ut som < 0,7 eller > 8,0

•         PT-INR > 4,8 ringes rekvirenten.

o   Sjekk at det ikke foreligger noen feilmelding på instrumentet.

o   Legg inn analysekommentar på reanalyserte resultat.

o   Svaret kommer på ringeliste. Ringeliste tas ut av kontor på hverdager (Levanger til kl 14.00, Namsos til kl 14.45). Ved ekstreme verdier gis likevel kontor beskjed. Utenom kontortid, ring selv.

 

Svarene autoverifiseres og overføres til Beaker.

Svar som ifølge verifiseringsreglene ikke blir autoverifisert, vurderes manuelt. Deretter godkjennes de i Beaker.

Autoverifiseringen er satt til å gjelde svar > 0,7 og < 4,0. Svar utenfor disse grensene og svar med alarm blir holdt tilbake for manuell vurdering.

 

Se prosedyre
ALM-MB-IKT; Manuell overføring av prøvesvar fra analysemaskin til online-PC

 

 

Svarrapportering

Se prosedyre
ALM-IKT; Svarrapportering, Beaker