Arbeidsbeskrivelse

 

Ansvar

 

Fagbioingeniør faggruppe II, har ansvar for vedlikehold av denne prosedyren. Alle som er opplært i Shigella dyrkning har ansvar for å følge denne prosedyren.

 

HMS/sikkerhetsinformasjon

 

Alle fæcesprøver SKAL såes ut i sikkerhetsskap
Benytt hansker og smittefrakk ved utsåing av prøver og spredning av selenitt. Selenitt er giftig ved innånding. Alt etterarbeid SKAL gjøres i sikkerhetsskap.

 

Arbeidets gang

 

Prøvematerialet og bearbeidelse av dette

 

Fæces bør helst tas på Cary Blair medium når prøve sendes fra primærhelsetjenesten og sykehuset Namsos. Hvis prøven er innsendt på glass uten preservering, se prosedyre: ALM-MM-Fæces; Vurdering, innlapping og primærutsæd av fæcesprøver

Analyseutstyr og klargjøring av disse

 

Se EQSID:

ALM-MM-Fæces; Vurdering, innlapping og primærutsæd av fæcesprøver

 

Feilkilder og interferens

 

•         For lang transporttid til laboratoriet.

•         For lav eller for høy temperatur under inkubering.

I helger/høytider, dersom det ikke blir tid til å vurdere skålene, skal skålene settes i kjøleskap etter 1 døgns inkubasjon. Skålene pakkes da i plastpose.

 

Fremgangsmåte/Utførelse av analysen

 

Alt etterarbeid med funn av bakterier som mistenkes å være Shigella skal utføres i godkjent sikkerhetskabinett klasse 2, da Shigella dysenteria (Type 1) tilhører smitterisikogruppe 3. Oppsett på Maldi-tof skal også settes opp i sikkerhetskabinett.

 

Vurdering

1 døgn:

 

XLD:

Etter 1 døgn ved 35°C, vurderes XLD-agaren.

 

Alle Suspekte (rosa/røde/farveløse) kolonier skal identifiseres med Maldi-tof.
Spre i tillegg til XLD-agar og MacConkey agar som renhetskontroll og for å ha materiale til sending og frys.

NB: Alle suspekte (rosa/røde/farveløse) kolonier som identifiseres som E. coli og/eller Shigella spp SKAL sendes SOH for videre identifisering, da våre metoder (Maldi-Tof) ikke skiller mellom E.coli og Shigella spp./EIEC.

 

Hvis stammen kommer ut med feks. Morganella morganii, Hafnia Alvei etc., kan Shigella dyrkning besvares med negativ.

 

Shigella spp. er ubevegelig. Bevegelighet testes i våtpreparat (1 dråpe saltvann blandes med bakterier som skal undersøkes - mikroskoperes).

 

Selenitt:

Etter 1 døgns inkubering spres selenittbuljongen med blå øse til XLD-agar som er merket med Shigella selenittbuljong og inkuberes videre i 1 døgn. Spredning fra selenitt vurderes likt som XLD-agar fra primærutsæd.

 

Følsomhetsbestemmelse

 

Shigella spp.

•         Skal alltid følsomhetstestes med lappediffusjon, MH-agar.

•         0,5 MacFarland i NaCl

Det testes da for følgende midler:

Antibiotika	Lappediffusjon
ciprofloxacin	M1
trimetoprim-sulfa	M1
Cefotaxim	M1 (MS)
Ceftazidim	M2 (MS)
meropenem	M2 (MS)
Kloramfenikol	M3

MS= Screening for resistensmekanismer.

M3 settes ikke opp rutinemessig, kun ved stammer med <2 følsomme midler.

 

Tolkning ved ESBL se: ALM-MM-Res; ESBL av Enterobacterales, Pseudomonas sp, Acinetobacter sp

Ved mistanke om ESBL_CARBA konferer alltid med mikrobiolog.

Oppfølgende tiltak i forbindelse med svar, melderutiner

 

Alle 1. gangs isolater skal: gjelder:

•         Meldes elektronisk (inneliggende) og telefonisk (alle) til rekvirent.

•         Meldes FHI.

•         Skal fryses: I:\HNT - ALM Fellesområde\Driftsenheter\MM\Fryslister. Fryses i boks 5.

 

Definisjon av nytt funn; er > 3 mnd.

Som 1. gangs isolat regnes isolater påvist > 3mnd
etter siste prøve (gjelder også ved ev. sykdomsresidiv),
eller ved mistanke om reinfeksjon.

 

Primær-agar oppbevares på benk, i pose, til prøven er blitt identifisert og frosset.

Se også: ALM-MM-Bakt; Melding til MSIS, smittekommentarer, frysing og sending av spesielle bakteriefunn ved bakteriologisk seksjon.

 

Svarrapportering

 

Generelt for besvarelse på diaréfremkallende agens; Når ingen diaréfremkallende agens er påvist ved dyrkning av prøven, ta med følgende kommentar til kliniker:

.BEGDIA: Begrenset diagnostikk er utført. Ved fortsatt mistanke om infeksjon, anbefales ny prøve. Ev ny prøve vil videresendes SOH for utvidet PCR-analyse.

Kommentaren skal altså KUN ut til kliniker dersom negativ dyrkning på alle parameter i dyrkningspakken.

Er prøven i tillegg sendt til SOH, skal kommentaren ikke ut.

Kommentaren skal legges inn i rekvisisjonsoppføring under fanen rekv.kommentar.

 

Negativ dyrkning:

NEG: Negativ

 

Positiv dyrkning:

MERK:

Melding til MSIS overføres automatisk i BEAKER

Kommentaren NMSY skal allikevel legges til i svaret til rekvirent.

 

Tidligere påvist (< 3 mnd.) stamme/isolat/funn av Shigella.:

V (vekst av)	Shigella spp.
.SMITTE	For smittevern, se Folkehelseinstituttets smittevernveileder og/eller helseinstitusjonens egne smittevernprosedyrer.
.NMSY	Nominativ meldepliktig sykdom
KJ	Kjent fra tidligere

 

Nytt funn (se definisjon ovenfor):

Alle nye funn skal ringes til rekvirent. Husk å legge dette inn i kom. Logg.

Foreløpig svar (kun inneliggende):

V (vekst av)	Shigella spp
. SMITTE	For smittevern, se Folkehelseinstituttets smittevernveileder og/eller helseinstitusjonens egne smittevernprosedyrer.

 

Endelig svar:

V (vekst av)	Shigella spp
Følsomhetsbestemmelsen er på bakgrunn av mistanke om Shigella spp. Våre tester kan ikke med sikkerhet påvise Shigella spp.
. SMITTE	For smittevern, se Folkehelseinstituttets smittevernveileder og/eller helseinstitusjonens egne smittevernprosedyrer.
.SENDSOH	Stammen sendes St.Olavs Hospital for PCR.
Endelig svar fra St. Olavs ved PCR skal vektlegges.
.NMSY	Nominativ meldepliktig sykdom

 

Sending av stammer

 

Sendes til	Sendes på Copan Eswab m/hvit kork	Stammer som skal sendes
SOH		Alle som identifiseres som E. coli eller Shigella spp

 

SOH videresender ev funn av Shigella spp. til FHI.

 

For rekvirering og sending av stammer se: ALM-MM-Mottak; Sending av prøver