Seksjonsleder sammen med medisinskfaglig rådgiver fra St. Olavs Hospital er ansvarlig for at teknikken og reagensene som brukes er validert og godkjent av norske helsemyndigheter. Den fagbioingeniør som har ansvar for laboratorieanalysene, skal sørge for at prosedyren blir oppdatert hver gang det skjer en endring.
Konserveringsmiddel er 0,1 % Na-azid, som er giftig hvis det svelges. Det kan også utvikle giftig gass hvis det kommer i kontakt med sink. Nøytraliseres med vann.
Spesielle forhold vedr. prøvetaking og forberedelse av pasient
Blodprøvetaking. Se Prosedyre ALM-MB-pre; Blodprøvetaking av voksne og barn
Prøvematerialet og bearbeidelse av dette
AB0-typing utføres i EDTA-blod, men kan også gjøres i blod tatt på glass med heparin, ACD og CPD-A.
Reagenser og klargjøring av disse
Anti-A og Anti-B, levert av Nerliens Meszansky AS, fabrikant Immucor Medizinische Diagnostik GmbH.
A1 positive celler og B-celler:
Cellene tappes på CPD-glass av blodgivere. De vaskes x 1 i diluent pH 7 og
slemmes opp til 3-5% løsning i Diluent Ph 7 eller Cellstab. Hvis cellene
slemmes opp i Diluent pH 7, må det vaskes ut nye celler hver dag. Celler som
slemmes opp i Cellstab har en holdbarhet på 3-4 uker ved oppbevaring i
2-8°C. Det er en forutsetning at cellene kontrolleres daglig. Vi tar fram nye celler
fra kjøleskapet hver mandag og merker disse med dato de er tatt i bruk. Cellene
han da stå på benken i 1 uke.
Diluent pH7, varenr. TV001 leveres i 1 liters kanne. Levert av Norsk Labex, produsert av Labex of Scandinavia.
Cellstab, ref.nr 005660, produsert av BioRad, levert av Norsk Labex.
Reagensene skal ha romtemperatur før de brukes.
For plassering av reagenser, se egen reagensoversikt.
Analyseutstyr og klargjøring av disse
Bioplater, produsert av Deltalab, levert
av Nerliens Meszansky.
Engangs plastpipetter, levert fra Sentrallageret.
Se prosedyre ALM-BB-Vakt; Problemer ved AB0-typing
Fremgangsmåte/Utførelse av analysen
NB! Dersom IH-500 er ute av drift, kan ABO/RhD-typing settes opp på gelkort. Se prosedyre ALM-BB-Vakt; ABO/RhD-typing med celletyping.
Det opprettes og tas ut Batchliste i Beaker:
· Merk aktuelle prøver i Uteståendeliste og velg Legg til Batch
· Hak av for Opprett og velg Batchtype: «Blodbank-manuelle analyser». Godta
· Skann prøvene og trykk Dokumenter
· Velg Dokumenttype: «Batcharbeidsark» og Skriv ut ny: «HMN Blodbank manuelle analyser»
· Trykk Skriv ut
· For mer utfyllende oppskrift, se vedlegg til prosedyre ALM-BB-Vakt; Bruk av ID-Reader med IH-Com
4 bioplater merkes med henholdsvis aA (anti-A),
aB (anti-B), Ac (A1 pos celler) og Bc (B-celler).
Ved siden av brønnen merket aA skrives de 3 siste siffer i pasientens
instrumentnummer. Nummeret skrives av fra glasset. Hvis vi arbeider med lange
serier, er det lurt å kontrollere at rekkefølgen på glassene er i samsvar med
rekkefølgen på arbeidslista før vi starter med typingen.
Analyseoppsett
· Tilsett 1 dråpe anti-A i brønn merket aA, 1 dråpe anti-B i brønn merket aB
· Brønner merket Ac og Bc tilsettes henholdsvis A1 pos celler og B-celler
· Tilsett 1-2 dråper pasientplasma i brønn merket Ac og Bc, og 1 dråpe blodlegemeoppslemming i brønn merket aA og aB
· Tilsettingen bør skje med plastpipette fordi en da best unngår å ødelegge blodlegemene slik at det blir hemolyse
· Dersom pasientprøven er vanskelig å få blodlegemer opp av, eller plasma er veldig geleaktig, kan en splitte prøven, MEN VÆR DA SPESIELT OPPMERKSOM PÅ AT MERKING AV PLASMAGLASSET BLIR RIKTIG (vi splitter prøven bare i spesielt vanskelige tilfeller)
· Innholdet på plata blandes godt ved å vippe plata
· Kan leses av med en gang, men reaksjonen med anti-A/anti-B er ikke garantert ferdig før etter 2 minutter. Reaksjon mellom plasma og blodlegemer kan ta 5-10 minutter. Agglutinasjon er positiv reaksjon, mens uagglutinerte celler er negativ reaksjon
De ulike AB0-typene vil ha følgende reaksjonsmønster:
|
Pasientens blodtype |
anti-A |
anti-B |
A-celler |
B-celler |
|
A |
+ |
- |
- |
+ |
|
B |
- |
+ |
+ |
- |
|
AB |
+ |
+ |
- |
- |
|
O |
- |
- |
+ |
+ |
|
|
Reaksjon mellom pasientens blodlegemer og kommersielle antisera |
Reaksjon mellom pasientens plasma og standard celler (dvs. celler med kjent blodtype) |
||
Oppsettet inneholder en direkte intern-kontroll. KONTROLLEN ER AT EN NORMAL AB0-TYPING ALLTID GIR POSITIV REAKSJON I TO AV FIRE FELT.
Alle prøver skal types to ganger av to
forskjellige personer.
Kontrolltypingen utføres på samme måte som beskrevet ovenfor, men man typer
bare blodlegemene.
For å kunne akseptere AB0-typingen uten videre kontrollundersøkelser som mikroskopering, reaksjon ved 4 grader og typing på kort, se prosedyre ALM-BB-Vakt; Problemer ved AB0-typing, må antigentypingen gi 3-4+ reaksjon. Celletypingen må gi minimum 2+ reaksjon.
Resultatene føres på Batchlista av den som utfører hovedtypingen. Den som hovedtyper, signerer. Den som utfører kontrolltypingen leser opp sine svar fra bioplata, før den signerer på Batchlista, under den som har utført analysen. Hvis det er få prøver og den som kontrollerer er alene, kan bioplata kontrolleres mot Batchlista.
Det må dokumenteres (kommentar i Beaker) hvilke tilleggsundersøkelser som er gjort for å konkludere AB0-typingen.
Svar legges inn i Beaker som Foreløpig verifisert av den som hovedtyper. Skriv også inn reaksjonene med gradering fra bioplata i de gule svarlinjene. Batchlista kontroll-leses mot resultatet i Beaker. Den som kontrolltyper verifiserer svarene ved å kjøre rutine P538 i ProSang. Hvis det er lange serier (mer enn 5 prøver) skal lista kontroll-leses før den verifiseres. Når det er en person alene på vakt, kan resultatet kontrolleres og verifiseres av denne. Prøven må da kontrolltypes av en annen person ved første vaktskifte.
Se prosedyre ALM-IKT; Svarrapportering, Beaker