Fagbioingeniør som er tillagt denne analysegruppen, faggruppe 1, har ansvar for oppdatering av denne prosedyren. Bioingeniørene som er opplært til denne type arbeid har ansvar for å følge prosedyren.
Spinalvæsken såes ut i avtrekk
Når dyrkningsresultat er verifisert kan prøvetakingsglasset kastes.
Spinalvæske oppbevart på benk over natt kan ikke benyttes som ekstra materiale til f.eks. PCR.
Med. biokjemi må vurdere sin bruk om de trenger ekstra materiale fra MM.
For us. Med PCR skal materialet være frosset.
Dyrkning skal ikke gjennomføres på frosset materiale.
Alle medier (agar-skåler og anrikningsbuljong) skal ha romtemperatur før utsåing.
Spinalvæsken skal oppbevares i romtemperatur til den er ferdig utsådd.
1 dråpe= 50µl
Objektglass med skravert felt for skriving av prøve nr. ev. personalia
Blyant
Steril engangs plastpipette 1 ml
Medier - se «Fremgangsmåte/Utførelse av analysen»
Sentrifuge
Reagenser for gramfarging
Kontaminering under prøvetaking
Kontaminering under utsåing
Kontaminering av medier
Feil ved inkubering – temperatur, atmosfære.
For kort inkubasjonstid
Standard medier er ikke optimale for aktuelle mikrobe.
Prøver av spinalvæske er øyeblikkelig hjelp prøver og skal behandles med en gang.
Gi beskjed til den som har arbeid med blodkulturer og spinalvæsker at det er ankommet spinalvæske.
Valg av medier:
1. Sjokoladeskål
2. Blodskål
3. Objekt glass som merkes med:
Prøvenummer
Dato
(bruk blyant på «skravert» området på objektglasset)
4. Anriknings buljong (anaerob buljong, 10ml)
Utsåing av spinalvæske (sentrifugert/usentrifugert):
· Sjekk kriterier for ekstraordinære rutiner (se nedenfor) og gjør en vurdering i forhold til hvor mye prøvemateriale som er tilgjengelig for dyrkning og preparat.
·
Alle spinalvæsker
sås ut på medier usentrifugert.
Deponer 4-5 dråpe (1 dråpe= 50µl) spinalvæske på
respektive skåler og 0,5ml-1 ml spinalvæske i anrikningsbuljong.
Dersom det ikke er nok materiale prioriter slik ut i fra punkt under valg av
medier:
1-3-2-4 ev. fordele dråper mellom 2 og 4
· Kriterier for tillaging av preparat:
Blakket spinalvæske:
Sentrifugering ikke nødvendig før tillaging av preparat
Klar spinalvæske:
< 2,5 ml spinalvæske før utsæd
Sentrifugering ikke nødvendig før tillaging av preparat
≥ 2,5 ml spinalvæske før utsæd
Sentrifuger før tillaging av preparat.
Sentrifuger med 1000 g (3000 RPM) i 15 minutter på sentrifuge «MIKROBIO 11153».
Tøm ev. sug av supernatanten med ei steril plastpipette (1 ml)
Supernatanten kastes.
Resuspander «bunnfallet» i de få (2-3) dråpene som blir igjen i det sentrifugerte glasset.
· Lag 2 preparat.
Deponer 1 dråpe spinalvæske på objektglasset.
Spre dråpen med å vippe forsiktig for å spre væske utover ev. bruk pipetten til å forme en sirkel midt på objektglasset.
La dråpen tørke på objektglasset inne i sikkerhetsbenk.
· Preparatet skal gramfarges
ALM-MM; Automatisk gramfarging med Previ Color Gram ev. ALM-MM-Id; Manuell gram farging
· Forsegle preparatet med å lime på dekkglass
· Mikroskoperes straks når dekkglasset er limt og tørket. (5-10 min)
· Vurdering og besvarelse av spinalvæskepreparat; se prosedyren ALM-MM-Puss; Vurdering av grampreparat
Spinalvæske utsådd på vakt av medisinsk biokjemi:
· Preparat skal mikroskoperes på morgenen av den som har arbeid med spinalvæske og blodkultur.
· Preparat av sentrifugert materiale er ikke nødvendig selv om ≥2,5 ml spinalvæske.
Sjekk om det om ekstraordinære rutiner skal utføres. Utfør disse dersom nok materiale.
Skriv i lab. kommentarfeltet om at spinalvæsken har stått på benk over natt.
SSB (spinalvæske stått på benk over natt)
Inkuber skålene og buljong i CO₂-inkubator (i8)
A. Dyrkning hvor ingen vekst (IV) avsluttes etter 5 døgn dersom ikke andre opplysninger tilsier videre dyrkning.
B. Ved funn i spinalvæske avsluttes dyrkning når endelig verifisering tilsier dette etter ev. følsomhetstest, kommentarer, videresending, melding, frysing av isolat. Dette avhenger av funn.
Skålene settes i «vekksett» (stativ som står i kjøleskap 1 uke)
Dette er i tillegg til ordinære rutiner og mengde spinalvæske må vurderes opp mot dyrkning og tillaging av preparat.
Soppdyrkning:
1. Hvor det ikke er rekvirert soppdyrkning fra rekvirent, men utføres ved gitte kliniske opplysninger:
- Nedsatt immunforsvar (bruk av kortikosteroider, cytostatika, immunsuppressiva)
- HIV-pasienter
- Brannskade
- Traume (sår/skade)
- Sprøytemisbruk (rusmisbruk med injeksjon)
2. Hvor det er rekvirert soppdyrkning fra rekvirent
Dyrkes på:
·
Soppblodkulturflaske
tilsettes 2 ml FOS og 1-2 ml spinalvæske.
Inkuber i blodkulturinkubator i 4 uker (28 dager) Utføres før sentrifugering
· Utfør Cryptococcus antigentest ALM-MM-Bakt; Cryptococcus antigen Utføres før sentrifugering
· Så ut (4-5 dråper) på Sabouraud-agar 36°C og selektiv Chrom-agar (29°C) for sopp.
Inkuberes aerobt i 7 dager. Sentrifugeres
Anaerob dyrkning ved primær utsæd på FA-agar (4-5 dråper): Utføres før sentrifugering
Ved kliniske opplysninger:
- Hjerneabscess/epidural abscess
- Intrakraniell flebitt (årebetennelse inne i hodet/kraniet)
- Tromboflebitt (årebetennelse i overflatisk vene)
- Mastoiditt (betennelse i ørebensknuten)
- Sinusitt (bihulebetennelse)
- Otitt (øreverk/ørebetennelse)
- Nevrokirurgi (kirurgisk behandling av hode- og nakkeskader, hjernehinneblødninger, svulster, medfødte misdannelser, infeksjoner, degenerative sykdommer (naturlige aldringsforandringer) i nakke og rygg, epilepsi, kroniske smerter og spasmer.
- Traume (skade/sår)
- Shuntinfeksjon (infeksjon relatert til kateter for ekstern drenasje av cerebrospinalvæske og til interne permanente shunter)
- Subduralt empyem
Blindutsæd av anaerob anrikningsbuljong:
Utføres ved samme indikasjoner som nevnt ovenfor.
Etter 5 dager inkubasjon (klar buljong) såes buljongen ut på FA-agar (anaerobt) og sjokoladeskål (aerobt) som dyrkes i 3 dager. 4-5 dråper på hver skål.
· Ved oppvekst på skåler gjøres identifisering, følsomhetstesting (settes alltid opp fra vekst) og besvarelse.
ALM-MM; Resistenspanel for blodkultur og spinalvæske Resistenspanel
ALM-MM-Blodkult; Utsåing, etterarbeid av positiv blodkultur og svarrapportering av blodkulturer Utsåing, etterarbeid av positiv blodkultur og svarrapportering av blodkulturer
· Ved blakket anaerob anrikningsbuljong så ut på blodagar, sjokoladeagar og FA-agar.
4-5 dråper på hver skål
Blodagar og sjokoladeagar : dyrkes inntil 5 dager aerobt ved ingen vekst (IV)
FA-agar: dyrkes inntil 5 dager anaerobt ved ingen vekst (IV)
MSIS skal ha melding om positive spinalvæskefunn ved de samme bakterieisolat som for ved blodkultur (melding kommer automatisk opp i Beaker).
Melde og varslerutiner se prosedyre ALM-MM-Bakt; Melding til MSIS, smittekommentarer, frysing og sending av spesielle bakteriefunn ved bakteriologisk seksjon.
Prøve med positiv mikroskopi og negativ dyrkning:
Prøven sendes mikrobiologi, SOH, for videre undersøkelse med PCR ev. andre tilgjengelige tester som SOH har. Konferer med vakthavende mikrobiolog ved SOH før sending.
Ved sending, opplys om at det var mistanke om bakterier etter mikroskopi av grampreparatet, men ingen vekst fra dyrkning.
For spinalvæske gjelder samme rutiner som ved blodkultur. Se frysskjema i TEAMS